Tinción Gram
Páginas: 5 (1150 palabras)
Publicado: 4 de mayo de 2014
1. INTRODUCCIÓN
La tinción Gram es usada para clasificar bacterias por sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color). A nivel del laboratorio es útil como test para un rápido diagnóstico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica. Las bacterias se tiñen Grampositivas, Gram negativas o no se tiñen debido a sus diferencias en la composición de su pared y arquitectura celular1.
Las bacterias Gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con yodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violetaal azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada1.
Las bacterias Gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con yodo escape y seareemplazado por el contracolorante1.
Clásicamente los reactivos utilizados para la realización de la tinción de Gram han sido el cristal violeta como colorante inicial, la solución de lugol para acomplejar a éste, el alcohol y/o acetona para la decoloración y la safranina o fucsina básica como contracolorante1.
En este práctico se procedió a teñir con tinción Gran inóculos de bacterias, y segúnel color que adoptaron clasificarlas en Gram positiva (se tiñen de violeta a azul claro), Gram negativas (se tiñen de rojo a rosa).
Las muestras se observaron en el microscopio óptico, con lentes objetivos 4x, 10x, 40x y 100x. En este último objetivo se pudo observar las formas de las bacterias, se pudo diferenciarlas en cocos, bacilos o espirilos.
2. OBJETIVOSDesarrollar habilidades para realizar tinción Gram
Conocer la utilidad de la tinción Gram.
Conocer el fundamento de la tinción Gram
Distinguir bacterias Gram positiva y Gram negativa.
Observar agrupaciones celulares.
3.1 DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
El portaobjeto se limpió con papel secante.
Se calentó una asa bacteriológica y se procedió a tomarun inoculo de un medio de cultivo.
Se extendió el inoculo por todo el portaobjeto.
Se cubrió todo el frotis con violeta cristal durante un minuto.
Se lavó con agua.
Se cubrió todo el frotis con lugol.
Se Lavó con agua.
Se decolo con alcohol acetona por 15 segundos.
Se lavó con agua.
Todo el frotis se cubrió con safrina por 10 segundos.
Se lavó con agua y se dejó secar.3.2 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN GRAM
El violeta cristal sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular de bacteriana, con la ayuda del mordiente que refuerza la unión de colorante. Las bacterias Gram positivas debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo violeta cristal- lugol y aún después del tratamiento con eldecolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o violeta una vez concluida la técnica de tinción.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando se tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que aumenta la permeabilidad celular dando como resultado la pérdida delcomplejo violeta cristal- lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la técnica de tinción2.
3.3 UTILIDAD DE LA TINCIÓN GRAM
La tinción Gran tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples y...
La tinción Gram es usada para clasificar bacterias por sus formas, tamaños, morfologías celulares y reacción Gram (color). A nivel del laboratorio es útil como test para un rápido diagnóstico presuntivo de agentes infecciosos, tanto en muestras como en cultivos en crecimiento, y adicionalmente sirve para valorar la calidad de la muestra clínica. Las bacterias se tiñen Grampositivas, Gram negativas o no se tiñen debido a sus diferencias en la composición de su pared y arquitectura celular1.
Las bacterias Gram (+) tienen una gruesa capa de péptidoglucano y gran cantidad de ácidos teicóicos que no son afectados por la decoloración con alcohol y/o acetona, reteniendo el colorante inicial acomplejado con yodo y visualizándose en distintos grados de tonos desde el violetaal azul claro, dependiendo de si la naturaleza de su pared celular está intacta o dañada1.
Las bacterias Gram (–) tienen en su pared celular una delgada capa de peptidoglucano ligada a una membrana externa por moléculas de lipopolisacáridos. Esta membrana externa es dañada por el alcohol y/o acetona de la decoloración, permitiendo que el primer colorante acomplejado con yodo escape y seareemplazado por el contracolorante1.
Clásicamente los reactivos utilizados para la realización de la tinción de Gram han sido el cristal violeta como colorante inicial, la solución de lugol para acomplejar a éste, el alcohol y/o acetona para la decoloración y la safranina o fucsina básica como contracolorante1.
En este práctico se procedió a teñir con tinción Gran inóculos de bacterias, y segúnel color que adoptaron clasificarlas en Gram positiva (se tiñen de violeta a azul claro), Gram negativas (se tiñen de rojo a rosa).
Las muestras se observaron en el microscopio óptico, con lentes objetivos 4x, 10x, 40x y 100x. En este último objetivo se pudo observar las formas de las bacterias, se pudo diferenciarlas en cocos, bacilos o espirilos.
2. OBJETIVOSDesarrollar habilidades para realizar tinción Gram
Conocer la utilidad de la tinción Gram.
Conocer el fundamento de la tinción Gram
Distinguir bacterias Gram positiva y Gram negativa.
Observar agrupaciones celulares.
3.1 DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
El portaobjeto se limpió con papel secante.
Se calentó una asa bacteriológica y se procedió a tomarun inoculo de un medio de cultivo.
Se extendió el inoculo por todo el portaobjeto.
Se cubrió todo el frotis con violeta cristal durante un minuto.
Se lavó con agua.
Se cubrió todo el frotis con lugol.
Se Lavó con agua.
Se decolo con alcohol acetona por 15 segundos.
Se lavó con agua.
Todo el frotis se cubrió con safrina por 10 segundos.
Se lavó con agua y se dejó secar.3.2 FUNDAMENTO DE LA TINCIÓN GRAM
El violeta cristal sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular de bacteriana, con la ayuda del mordiente que refuerza la unión de colorante. Las bacterias Gram positivas debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retienen el complejo violeta cristal- lugol y aún después del tratamiento con eldecolorante conserva el colorante básico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o violeta una vez concluida la técnica de tinción.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando se tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que aumenta la permeabilidad celular dando como resultado la pérdida delcomplejo violeta cristal- lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por la cual estas células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez concluida la técnica de tinción2.
3.3 UTILIDAD DE LA TINCIÓN GRAM
La tinción Gran tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples y...
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