toxinas

Toxina de pertussis
La toxina pertussis se aísla y se purifica a partir del medio de cultivo de Bordetella pertussis. La toxina provoca una serie de respuestas en una variedad de tipos de células (69, 89, 90, 158). Estas respuestas aparentemente se derivan de los efectos inducidos por la toxina en el sistema de la adenilato ciclasa, que en última instancia conducir a un aumento de lasconcentraciones de AMPc. La estructura pentapéptido de la toxina pertussis (discutido en detalle en la revisión relacionados [40]) es compleja, pero funcionalmente se ajusta al modelo subunidad de unión enzimática AB (210). El promotor de 28.000 MW S (genéricamente, la parte A) está activo en ADP-ribosilación. En las preparaciones de células rotas, es como bioquímicamente eficaz como la toxina intacta(210). El oligómero B (cuatro péptidos) bloquea la acción biológica de toda la toxina (211), al parecer por competir por la ocupación del receptor. Aunque carece intrínseca
la actividad enzimática, el oligómero B solo se provocar respuestas similares a la insulina o mitogénica de las células. Estas respuestas presumiblemente el resultado de B-inducida oligómero-reticulación o la agregación de lasproteínas de la superficie celular (receptor de?). Como tales, parecen análoga a las respuestas celulares a la concanavalina A o anticuerpos antirreceptor (211). Esencialmente no se sabe nada acerca de la naturaleza del receptor para la toxina de pertussis. Poco más se sabe sobre el mecanismo por el que la toxina pertussis entra en las células diana. Tamura et al. (211) encontraron que el promotorUn añadido solo a las células no evocar una respuesta. Sin embargo, si las células se trataron previamente con el oligómero B, se lavaron, y luego se exponen al promotor A, se observó una respuesta toxina similar. Aparentemente, después de la unión a las células, el oligómero B permanece en la superficie en un estado reconocido por el promotor Una. Este experimento demuestra el importante papel delos oligómeros en la entrega del (véase abajo) Una promo-er enzimáticamente activa a su sitio intracelular presunto de acción. En comparación con muchas otras toxinas bacterianas, sin embargo, estos resultados son inusuales. En la mayoría de los casos, no es posible añadir sucesivamente los componentes de unión y enzimáticos a las células y obtener la respuesta tóxica. Aunque la toxina pertussisafecta el sistema de la adenilato ciclasa, varios estudios han demostrado que su ofaction modo es diferente de la de la toxina del cólera. La incubación de las membranas celulares de glioma C6 con la toxina pertussis, NAD y ATP con-vierte la guanilato ciclasa a un estado en el que los efectos de la activación de los agonistas o GTP beta-adrenérgicos o ambos se han mejorado notablemente. El gradode mejora en correlación con el nivel y la tasa de la toxina catalizada por ADP-ribosilación de una proteína de membrana de 41.000 MW (91, 92). Esta proteína era claramente distinta de la proteína G 45,000 MW ADP-ribosy-Lated por la toxina del cólera, como se muestra por los experimentos comparativos directos (11, 91). Diálisis de equilibrio y de fotoafinidad experimentos de etiquetado demostradoque esta proteína 41.000 MW tiene un sitio de unión específico para los nucleótidos de guanina (11). Por lo tanto, parece que hay dos proteínas de unión a GTP regulatorios asociados con la enzima adenilato ciclasa sistema. Uno, la proteína G, es susceptible a ADP-ribosilación por el cólera o la enterotoxina de E. coli. La otra, denominada la Gi o proteína Ni, pueden ADP-ribosylated por la toxinapertussis. Se realizaron estudios similares en otras líneas celulares como fibroblastos 3T3 (158), adipocitos (159), o la línea de neuroblastoma x glioma células híbridas NG108-15 (19, 101). El uso de la línea de células NG108-15 era de particular interés, ya que estas células tienen alfa-adrenérgicos, colinérgicos, muscarínicos, y los receptores de opiáceos, todos los cuales inhiben la adenilato...