Transaminasas

Determinación de Transaminasas |




DETERMINACIÓN DE TRANSAMINASAS
INTRODUCCIÓN
Las transaminasas son enzimas intracelulares que catalizan la transferencia reversible de un grupo amino entre un aminoácido y un cetoácido. Esta función es esencial para la producción de los aminoácidos necesarios para la síntesis de proteínas en el hígado.
El proceso de transaminación consiste en latransferencia intermolecular de un grupo de α-aminoácido dador a un cetoácido aceptor, sin formación intermedia de amoniaco. Aunque las transformaciones químicas con el amoníaco son conocidas hace tiempo, y la conversión de un aminoácido en el correspondiente cetoácido en el organismo animal fue reconocida prácticamente por Neuerbauere 1909, la primera reacción de transaminación en preparacionesde musculo de pechuga de paloma metabolizaba los ácidos glutámico y aspártico sin producir baja en el contenido total de nitrógeno. Sin embargo, Braunsein y Kritzmann fueron quienes descubrieron la transaminación enzimática. Estos investigadores rusos demostraron que, en presencia de ácido glutámico, las preparaciones de músculo podían convertir el ácido del ácido pirúvico en alanina.

No hayduda de que la transaminación desempeña un papel clave en el metabolismo intermediario, toda vez que interviene en la síntesis degradación de aminoácidos en las células vivas. Los tres aminoácidos: ac. Glutámico ac. Aspártico y alanina pueden ser convertidos por tal medio en sus correspondientes α-cetoácidos , los cuales forman parte del ciclo del ac. Cítrico. También se ha sugerido que latransaminación puede intervenir en el ciclo ornitin-citrulina y en la síntesis de la urea.

Comparación de las actividades de las transaminasas e homogeneizados de tejido humano.

TEJIDO | GOT U/G DE TEJIDO | GPT U/G DE TEJIDO |
Corazón | 156 000 | 7 000 |
Hígado | 142 000 | 44 000 |
Musculo esquelético | 99 000 | 4 800 |
Riñón | 91000 | 19 000 |
Páncreas | 28 000 | 2 000 |
suero | 20 |16 |

OBJETIVOS
* Determinar la cantidad de transaminasas en la sangre
* Identificar la concentración de transaminasa utilizando la curva de calibración
FUNDAMENTO
Es un método enzimático cinético.
GOT CATALIZA LA SIGUIENTE REACCIÓN
L-aspartato + α-cetoglutarato GOT glutamato+oxalacetato
GPT CATALIZA LA SIGUIENTE REACCIÓN
L-Alanina + α-cetoglutarato GPTglutamato + piruvato

TÉCNICA
REACTIVO | BLANCO | MUESTRA (SUERO) |
SUSTRATO (GOT O GPT) | 0,5ml | 0,5ML |

Colocar en baño maría por cinco minutos a 37ºc.

SUERO | | 0,1ml |
H2OD | 0,1ml | |

Mezclar por agitación suave e incubar por exactamente 30 minutos a 37ºc y luego agregar

REACTIVO 2,4 dinirofenilhidracina | 0,5 ML | 0,5ML |

Mezclar. Dejarlo a 37ºcpor 10 minutos. Luego agregar
Diluyente de enzima Na OH | 5 ML | 5ML |

Mezclar por inversión. Retirar del baño maría después de dos minutos leer la absorbancia a 505nm.

CÁLCULOS DE RESULTADOS EMPLEANDO CURVA DE CALIBRACIÓN
A) CURVA DE CALIBRACIÓN GPT

CONCENTRACIÓN U/L | ABSORBANCIA |
0 | 0 |
9 | 0,046 |
18 | 0,111 |
25 | 0,145 |
37 | 0,172 |
46 | 0,217 |
56 | 0,252|
79 | 0,33 |
113 | 0,374 |

AbsM – AbsB = Abs FINAL

DATOS: Abs M = 0,294 Abs final = 0,024
Abs B = 0,270

B) CURVA DE CALIBRACIÓN GOT

CONCENTRACIÓN U/L | ABSORBANCIA |
0 | 0 |
7 | 0,168 |
12 | 0,173 |
20 | 0,195 |
28 | 0,250 |
37 | 0,266 |
48 | 0,359 |
81 | 0,403 |

AbsM – AbsB = Abs FINAL

DATOS:Abs M = 0,299 Abs final = 0,029
Abs B = 0,270

VALORES REFERENCIALES
Se considera normal según este método hasta 12 U/L.
CAUSAS DE INCREMENTO DE TRANSAMINASAS
Tener las transaminasas altas es un problema de salud bastante habitual. Sin embargo, para muchas personas que se ven afectadas aún no se ha detectado. De hecho, en una gran cantidad de...