transporte de glucosa en levaduras


INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL.
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA MICROBIANA

PRÁCTICA 1. TRANSPORTE DE GLUCOSA EN LEVADURAS

EQUIPO 4:


SECCIÓN: 1 GRUPO: 5IV1


28/Agosto/2014


Hipótesis
Al ser Saccharomyces cerevisiae un organismo seleccionado por la biología celular y la genética, los transportes de glucosa han sido estudiados, en el cual sehan identificado que el transporte se lleva a cabo a través de difusión facilitada, en los cuales son llevadas por proteínas transportadoras principalmente de la familia de los genes HTX1 y HTX3 aunque se han identificado muchos transportes diferentes.
Si el transporte de glucosa en la levadura Saccharomyces cerevisiae, es mediado pasivo, se necesita una proteína de transporte, la cual se veráinhibida con cambios de temperatura, un agente bloqueador que cambie su conformación (N-etil maleimida) y no por agentes desacoplantes de la fosforilación oxidativa (2,4-dinitrofenol).
Objetivos
Con la aplicación de agentes fisicoquímicos pretendemos concluir el mecanismo de transporte utilizado por Saccharomyces cerevisiae para captar glucosa.
Demostrar cómo afectan el DNF y NEM en eltransporte de glucosa en Saccharomyces cerevisiae.
Registro de datos
Tabla 1. Absorbencias obtenidas para la construcción de la curva tipo por el método del DNS
µg DE GLUCOSA
ABSORBENCIA (540 nm)
0
0
100
0.106
200
0.270
300
0.414
400
0.554
500
0.675
Tabla 1. Se observan las absorbencias obtenidas leídas a 540nm en un espectrofotómetro, para la elaboración de una curva tipo.

Tabla 2.Absorbencias obtenidas en los cinco sistemas a diferentes tiempos.
N° matraz
0 min.
10 min.
20 min.
30 min.
1
0.498
0.477
0.400
0.454
2
0.416
0.271
0.041
0
3
0.440
0.368
0.269
0.211
4
0.438
0.480
0.473
0.427
5
0
0
0
0
Tabla 2. Se muestran las absorbencias obtenidas para cico sistemas que se manejaron a diferentes condiciones, en este caso fue el tiempo en el cual sedetenia el transporte de glucosa.

Tabla 3. Registro de glucosa residual en cada matraz a distintos tiempos (mg de glucosa/ml)
N° matraz
0 min.
10 min.
20 min.
30 min.
1
1.221
1.1706
0.9856
1.1153
2
1.0243
0.6763
0.1243
0
3
1.0816
0.909
0.6713
0.5323
4
1.1776
1.161
1.077
1.0506
5
0
0
0
0
Tabla 3. Se muestran los datos obtenidos de glucosa residual.Tabla 4. Registro de Glucosa consumida en cada sistema a distintos tiempos. (mg/mL de glucosa consumida)
N° matraz
0 min.
10 min.
20 min.
30 min.
1
0
0.0504
0.2354
0.1057
2
0
0.348
0.9
1.0243
3
0
0.1726
0.4103
0.5496
4
0
0.1006
0.0166
0.127

Grafica 1.


Gráfica 1. Curva tipo para la obtención de la glucosa residual en cada uno de los sistemas manejados en elexperimento.








Gráfica 2.



Gráfica2. Se muestra la glucosa consumida en función del tiempo, para observar con que reactivo se consumió mas glucosa y con cual se inhibió el transporte de glucosa.

Pendientes de las rectas obtenidas en la gráfica 2.
Matraz
Pendiente
Matraz 1
0.0005
Matraz 2
0.0362
Matraz 3
0.0189
Matraz 4
0.0047




Manejo de datos

Cálculos paraglucosa teórica inicial.


De Glucosa (TEORICO)

Cálculos para obtener glucosa residual en cada sistema
Se utilizó la ecuación de la recta obtenida de la curva tipo que es
y = 1.389x10 -3 x - 0.01086. Despejando a “X” queda: donde:
x= ; y= Absorbencias
Sustituyendo el valor de “y” (tabla 2) en la ecuación de la recta se obtiene “x” para cada uno de los matraces a los diferentestiempos.
Matraz 1, tiempo 10min.
mg= (1x10-3) 0.3663mg

Para obtener los mg/ml de glucosa residual, el dato obtenido se multiplico por el inverso de la alícuota que fue de 0.3mL
X= 0.3663mg
Cálculos para obtener glucosa consumida en cada sistema.

Posteriormente se obtiene la glucosa consumida con la sig. Formula:
Glc. Consumida= Glc. Inicial al t(0) – Glc. Residual real
Sustituyendo...