Técnicas De Tincion

Técnicas de tinción. Fundamentos
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con elmicroscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que larodea, y el medio más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes. Estospueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o pararevelar la presencia dedeterminados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cápsulas, paredescelulares, centros de actividad respiratoria, etc.Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, procesollamado fijación. Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque tambiénpuede fijarse con sustancias químicas como formaldehido,ácidos y alcoholes. Después de lafijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estruturales en elprotoplasma. La fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre unportaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente elproceso de tinción. La fijación produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción,porel contrario, hace que las células aparezcan mayores que lo que son realmente, de maneraque las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con muchaprecisión.La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica porlos materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadaspositivamente (cationes)y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargadosnegativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos. Ejemplos decolorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantesson moléculas cargadas negativameute (aniones) y se combinan con los constituyentes celularescargados positivamente, tales como muchas proteínas.Esos colorantes incluyen la eosina, lafucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; loscolorantes de este grupo se combinan con los materiales lipídicos de la célula, usándose amenudo para revelar la localización de las gotículas o depósítos de grasa. Un ejemplo decolorante liposoluble es el negro Sudán.Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que lacélula haya sido tratada con otrasustancia química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente;un mordiente habitual es el ácido tánìco. El mordiente se combina con un constituyente celular ylo altera de tal modo que ahora sí podrá atacar el colorante.Si se desea simplemente incrementar el contraste de las células para la microscopía, sonsuficientes losprocedimientos simples de tinción. El azul de metileno es un buen colorantesimple que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color tanintenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la presencia debacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tiñe.
 
La tinción negativa es el reverso delprocedimiento de tinción usual: las células se dejan sinteñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil delas células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tieneafinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tintachina (que es una suspensión de particulas de carbono coloidal) ola nigrosina (un colorantenegro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contrastede las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia decápsulas alrededor de las células bacterianas.Los métodos de tinción son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaución, ya quepueden conducir a errores. Las moléculas...