Verificación De Micropipetas

INTRODUCCION:
La medida y transferencia (pipeteado) de volúmenes de líquido del orden de los ml y µl es una operación muy frecuente en el laboratorio científico y médico. Dadas sus numerosas ventajas, la mayor parte de estos trabajos se llevan a cabo con modernas micropipetas automáticas, que son el aparato ideal para la dosificación efectiva de pequeñas cantidades de líquido. Las exigenciasimpuestas a las pipetas han aumentado continuamente en los últimos años dada la tendencia a usar volúmenes cada vez más pequeños. La moderna gestión de calidad (normas ISO, GLP, y GMP) exige una comprobación periódica de aparatos de medida volumétrica. Controles gravimétricos periódicos y un ajuste de las micropipetas, son requisitos fundamentales de los modernos sistemas de garantía de calidad.Calibración (comprobación gravimétrica) Por calibración de micropipetas se entiende la comparación de volumen real y volumen teórico. El volumen real se determina por vía gravimétrica. El apartado 8655 de ISO (International Standardization Organization) de 1990, y la DIN 12650, son lasreglamentaciones más utilizadas para establecer las condiciones de una micropipeta.
Las reglamentaciones de ISO yDIN definen diferentes niveles de controles para micropipetas, (testeo funcional, testeo rápido, testeo de calibración, etc.), sin embargo ambas coinciden en recomendar una calibración completa cada SEIS meses.
La calibración esta descrita en las instrucciones de manejo de las micropipetas, y regulada mediante normas técnicas (DIN 12650, ISO 9000).
FUNDAMENTO
MÉTODO GRAVIMÉTRICO:
Consiste endeterminar la masa del líquido que puede contener o entregar a una medida volumétrica o aforo o punto de referencia específico de un recipiente volumétrico. Se utiliza como medio d transferencia el agua.
MÉTODO FOTOMÉTRICO:
Consiste en la lectura de absorbancia de una serie de tubos con una solución de K2Cr2O7 al 8% en agua destilada, en cada uno colocar 10 µL de esta solución por cada mililitrode agua destilada, y utilizar un estándar relativo (utilizando múltiplos enormes de esta solución) para calcular el volumen que mide realmente la micropipeta.

I. K2Cr2O7, para espectrofotómetro o fotómetros que pueden leer entre 492 y 510 nm
MÉTODO FOTÓMETRICO.

En cada uno de los 20 tubos, realizar diluciones 1:10 con K2Cr2O7 al 8%.

PROCEDIMIENTRealizar las diluciones con la pipetaque se desee verificar.
O
Mezclar por inversión.

VERIFICACIÓN DE LA PRECISIÓN.




Ajustar el aparato a cero de absorbancia con agua destilada con λ=500 nm.

Determinar la absorbancia de cada tubo.

Calcular el CV con las absorbancias obtenidas.



II. K2Cr2O7, para espectrofotómetro o fotómetros que pueden leer entre 492 y 510 nm

Leer la absorbanciadel “estándar relativo” simultáneamente con los tubos que se determinó la imprecisión

Calcular el volumen que la pipeta está midiendo

VERIFICACIÓN DE LA EXACTITUD.




% error
=valor observado-valor realvalor real x100
Calcular el porcentaje de error

volumen que mide la pipeta µL
=A promedio x VNPA del estándar relativo


MÉTODO GRAVIMÉTRICO.
Limpiar la punta conagua destilada pipeteando el volumen ajustado al menos 3 o 4 veces.

Selecciona el VNP que se desee analizar.

Utilizar pipetas limpias, acondicionarlas a la temperatura de referencia del material, de los equipos y del laboratorio.




Tarar la balanza con un recipiente y expulsar el volumen seleccionado sobre el contenedor.

Tarar la balanza con un recipiente y expulsar elvolumen seleccionado sobre el contenedor.

Aspirar el volumen seleccionad, manteniendo la pipeta vertical.



Anotar los resultados obteneos. Utilizar balanzas con una legibilidad de 0.001 mg.

Leer el peso en mg y repetir la operación al menos 5 veces.



RESULTADOS
* Verificación de presión por método fotométrico
ANALISTA: Marlene
Nº | A | Nº | A |
1 | 0.256 | 6 | 0.241 |...