Vilirrubina Directa

BILIRUBIN T&D- J

Bilirrubina Total y Directa
Jendrassik – Grof. Colorimétrico
Determinación cuantitativa de bilirrubina IVD
Conservar a 2-8ºC PRINCIPIO DEL MÉTODO La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, sólo laprimera reacciona en medio acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con cafeína para que reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de 1,2,3 bilirrubina presente en la muestraensayada . SIGNIFICADO CLÍNICO
La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina. Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis. La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia: Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteracioneseritropoyéticas, presencia de drogas. Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas1,6,7. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

CÁLCULOS
− Con Calibrador: ( A ) Muestra − ( A ) Blanco Muestra x Conc. Calibrador = mg/dL de bilirrubina ( A ) Calibrador − ( A ) Blanco Calibrador − Con Factor: ((A) Muestra –(A) Blanco Muestra) x Factor* = mg/dL bilirrubina en la muestra

*Factor:

Concentración del Calibrador ; Factor teórico = 17,5 ( A ) Calibrador − ( A ) Blanco Calibrador

Factor de conversión: mg/dL x 17,1 = µmol/L.

CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores halladosse encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

Bilirrubina Total Hasta 1,1 mg/dL ≅ 18.81 µmol/L Bilirrubina Directa Hasta 0,25 mg/dL ≅ 4.275 µmol/L Estos valores son orientativos. Esrecomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Rango de medida: Desde el límite de detección de 0,1 mg/dL hasta el límite de linealidad de 20 mg/dL. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2. Precisión:

VALORES DE REFERENCIA

1

REACTIVOS R1 R2 R3Opcional Ácido sulfanílico Sodio nitrito Cafeína
BILIRUBIN CAL 20 mg/dL

30 mmol/L 50 mmol/L 100 mmol/L Ref:1002250

Bilirrubina D Intraserie (n= 20) Media (mg/dL) 0,78 2,28 SD 0,01 0,01 CV (%) 1,28 0,65

Interserie (n= 20) 0,80 2,18 0,01 0,03 1,63 1,53

PREPARACIÓN Todos los reactivos están listos para su uso. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables hasta lafecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita la contaminación durante su uso. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. - Desarrollo de color en el R 2. MATERIAL ADICIONAL - Espectrofotómetro o analizador con cubeta paralecturas a 540 nm. - Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. - Equipamiento habitual de laboratorio. MUESTRAS 1 Suero o plasma libre de hemólisis . Proteger de la luz. Estabilidad de la muestra: 4 días a 2-8ºC o 2 meses a –20ºC. PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm...