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Páginas: 1 (250 palabras)
Publicado: 10 de marzo de 2014
Western Blotting Tecnica
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la autorradiografía, y permite identificar la presencia deuna banda concreta en un gel de electroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
Si se trata de proteínas, la técnica se llama Westernblot. Se utilizan anticuerpo marcados con radioactividad para identificar cuál es la banda que presenta la proteína que me interesa localizar, Si se trata de DNA, latécnica se llama Southern blot.
Se utilizan sondas de DNA (moléculas de DNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandasdel gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda, Si se trata de RNA, la técnica se llama Northern blot. Se utilizan sondas de RNA (moléculas de RNAmarcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda.
Electroforesis: 1Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis con proteínas se utiliza un gel de poliacrilamida. 2Con ácidos nucleicos se utiliza ungel de azarosa.
Transferencia (BLOTTING ): Se transfieren las bandas de proteínas o de ácidos nucleicos desde el gel hacia una membrana de nitrocelulosa (flechasazules) para que puedan reaccionar con la sonda radioactiva.
Autoradiografia: Se añaden Anticueros radiactivos contra una proteína o sondas radioactivas de ácidosnucleicos (con secuencia conocida). Se espera a que reaccionen (A). Se coloca la membrana de nitrocelulosa sobre una placa fotográfica y se revela (B).
La técnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que la autorradiografía, y permite identificar la presencia deuna banda concreta en un gel de electroforesis, bien sea de proteínas o de ácidos nucleicos:
Si se trata de proteínas, la técnica se llama Westernblot. Se utilizan anticuerpo marcados con radioactividad para identificar cuál es la banda que presenta la proteína que me interesa localizar, Si se trata de DNA, latécnica se llama Southern blot.
Se utilizan sondas de DNA (moléculas de DNA marcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandasdel gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda, Si se trata de RNA, la técnica se llama Northern blot. Se utilizan sondas de RNA (moléculas de RNAmarcadas con radioactividad y con una secuencia conocida) para identificar qué bandas del gel contienen secuencias complementarias a la de la sonda.
Electroforesis: 1Se separan las proteínas o los ácidos nucleicos en un gel de electroforesis con proteínas se utiliza un gel de poliacrilamida. 2Con ácidos nucleicos se utiliza ungel de azarosa.
Transferencia (BLOTTING ): Se transfieren las bandas de proteínas o de ácidos nucleicos desde el gel hacia una membrana de nitrocelulosa (flechasazules) para que puedan reaccionar con la sonda radioactiva.
Autoradiografia: Se añaden Anticueros radiactivos contra una proteína o sondas radioactivas de ácidosnucleicos (con secuencia conocida). Se espera a que reaccionen (A). Se coloca la membrana de nitrocelulosa sobre una placa fotográfica y se revela (B).
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