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INTRODUCCIÓN

Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.

Determinar la concentración de proteínas de una muestra biológica es una técnica de rutinabásica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta. Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en la propiedad intrínseca de las proteínas para absorber luz en el UV o la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes. Entre estos últimos podemos encontrar al método de Biuret, Lowry y Bradford.

Elmétodo de Bradford se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue G.250 (Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejo proteína- colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 mg), simple, rápido, barato y pocassustancias interfieren en su determinación. Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.


OBJETIVO
Cuantificar la concentración de proteínas que se encuentran en una muestra problema, a través del método de Bradford.


HIPÓTESIS
Si con el reactivo de Bradford una muestra al pasarse por el espectrofotómetro se puede calcular su cantidad de proteína, alhacer la curva patrón de soluciones con diferentes concentraciones ya conocidas de proteína se puede calcular la cantidad de proteína contenida en una muestra problema.












RESULTADOS
Tubo
Concentración (μg/ml)
Absorbancia
1
0
0
2
5
0,1043
3
10
0,1313
4
15
0,1523
5
20
0,1615
6
25
0,1732
7
11,5
0,113


En la tabla se muestran los datos de concentraciónde proteína y absorbancia de cada tubo, correspondiente del tubo 1 al 6 la curva patrón, y el tubo 7 el problema. La concentración problema se obtuvo con la ecuación resultante del análisis de regresión de la curva patrón; se puede ver su gráfica con un R cuadrada de 0.78 y al redondear obtenemos 0.80, podemos decir que la ecuación sí es confiable para predicciones.
DISCUSIÓN
Según la teoríaal momento de colocar el reactivo de Bradford las soluciones se ponen de color azul, dependiendo de la cantidad de proteínas contenidas en las muestras es la intensidad del azul, entre más proteínas, más oscura se vuelve la solución.
Desde el momento en el que se prepararon los tubos de la curva y el problema se puede hacer un estimado de la concentración con solo cotejar la muestra con cadauno de los patrones, en este caso, se ubico en la zona intermedia de la curva desde un principio.

CONCLUSIÓN
La técnica de Bradford es una excelente forma de calcular la cantidad de proteína contenida en una muestra, así como para hacer cálculos predictivos con el uso de una curva patrón, sin embargo, no es la única técnica existente para determinar proteínas, todo depende del tipo demuestra que se tenga como problema.



CUESTIONARIO

¿Cuáles son los fundamentos de los siguientes métodos para cuantificación de proteínas?

Kjeldhal
Se caracteriza por el uso de ebullición, ácido sulfúrico concentrado que efectúa la destrucción oxidativa de la materia orgánica de la muestra y la reducción del nitrógeno orgánico a amoníaco el amonio es retenido como bisulfato de amonio ypuede ser determinado in situ o por destilación alcalina y titulación.

Lowry
El método de Lowry se basa en la reacción de las proteínas con el reactivo de Folin dando un complejo coloreado. Este reactivo es una disolución de tungstato sódico y molibdato sódico en ácido fosfórico y ácido clorhídrico. El mecanismo del proceso es el siguiente: el Cu 2+ , en medio alcalino, forma un complejo con...