Bioensayo de toxicidad aguda con semillas de lechuga (Lactuca sativa L.)




Introducción

El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba estática de toxicidad aguda (72 horas de exposición) en el que se pueden evaluar los efectos fitotóxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros días de crecimiento. Como puntos finalespara la evaluación de los efectos fitotóxicos, se determina la inhibición en la germinación y la inhibición en la elongación de la radícula y del hipocótilo (figura 1).


Durante el período de germinación y posteriormente los primeros días de desarrollo de la plántula ocurren procesos fisiológicos en donde sustancias tóxicas pueden interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal dela planta, siendo una etapa de sensibilidad frente a factores adversos.
Es importante determinar el desarrollo de la radícula y del hipocotilo, ya que son indicadores representativos para determinar la capacidad de establecimiento y desarrollo de la planta.
Además, al evaluar el efecto en la elongación de la radícula y del hipocotilo, se puede ponderar el efecto tóxico de compuestos solublespresentes en niveles bajos de concentración, los cuales no son suficientes para inhibir la germinación, pero pueden retardar o inhibir los procesos de elongación de la radícula o del hipocotilo.
En este práctico, se realizó un bioensayo con semillas de lechuga, las cuales fueron expuestas a Cloruro de cobre a distintas concentraciones por un período de 72 horas, en oscuridad, a 22 ± 2 ºC.
Esteensayo puede utilizarse para la evaluación de la toxicidad de compuestos solubles, de aguas superficiales, aguas subterráneas, aguas para consumo humano, etc. También, permite evaluar la fitoxicidad en muestras coloreadas o con elevada turbiedad de manera directa y sin necesidad de filtración previa.
Objetivo: Evaluar los efectos fitotoxicos de una solución de Cloruro de Cobre (CuCL2) en el proceso degerminación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas en los primeros días de crecimiento.


Materiales y métodos.

Materiales.
1. Semillas de Lechuga (Lactuca sativa L var. mantecosa) sin curar (sin fungicidas o plaguicidas).
2. 4 cápsulas Petri de 60 mm de diámetro.
3. Papeles filtro Whatman núm. 3 (o equivalente), 50 mm de diámetro.
4. Matraces Erlenmeyer de 125 mL.
5.Pipetas volumétricas de 5 mL.
6. Pinzas.
7. Papel milimetrado.
8. Solución stock CuCL2 a una concentración de 100 mg/L
9. Cámara oscura termostatizada (22± 2 °C).


Métodos.

1. De la solución ya preparada de cloruro de cobre, se extrajeron 5 ml de la disolución a 25%, 2 ml de la disolución al 10% y 1 ml de la disolución a 5%. Luego se colocaron en 3 matraces y se aforaron a 100 ml.

2.Se colocó papel filtro en cada placa Petri; 3 placas fueron humedecidas con las soluciones de 5, 2 y 1 ml de cloruro de cobre. La placa 4 fue humedecida con agua destilada ya ésta era el control.

3. Se colocaron 10 semillas de lechuga (Lactuca sativa) en las cuatro placas Petri con una pinza y teniendo cuidado de que estuvieran bien separadas entre sí para permitir la elongación de lasradículas.

4. Las placas fueron tapadas y se colocaron en la cámara oscura cubriéndolas de la luz inmediatamente.

5. Se dejaron en incubación durante 72 horas a una temperatura de 22± 2 °C.







Resultados.

FICHA

EFECTOS EN LA GERMINACIÓN Y EN LA ELONGACIÓN DE LA RADÍCULA E HIPOCÓTILO

Especie: Lechuga (Lactuca sativa).
Tóxico o muestra: Cloruro de cobre (CuCL2).
Control:estático.
Volumen de ensayo: 2,5 mL.
Factor de dilución: 25%, 10% y 5%.
Tiempo de exposición: 72 hrs.
Fecha: 07 de Noviembre del 2014.
 
 
Nº de semillas con germinación normal
Promedio longitud Radícula
Promedio longitud hipocótilo
Observaciones (síntomas morfológicos)






 
 




Control
1
4
6,5
3,5
tricomas

2
9
7,17
3,89
tricomas

3
7
9,36
4,64
tricomas...