Biotecnoligia

Biotecnologías — Presentation Transcript
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• 2. Biotecnología El desarrollo de la ciencia básica y el entendimiento de los procesos que gobiernan la biología y a los seres vivos es fundamental.
• 3. Las tecnologías de ADN recombinante constituye una mezcla de técnicas, que permiten, la fragmentación , la separación , secuenciación , hibridación de ácidos nucleicos, clonaje de ADN y laingeniería genética .
• 4. El ADN se puede fragmentar mecánicamente, si se hace pasar varias veces la suspensión de ADN a través de la aguja de una jeringa La obtención de fragmentos específicos fue posible tras el descubrimiento de enzimas de restricción ( endonucleasas ). Estas enzimas pueden aislarse de bacterias, cortan la molécula de ADN de doble cadena en lugares definidos por la secuencia denucleótidos
• 5. Las enzimas de restricción pueden generar extremos: rombos o cohesivos estas moléculas de ADN producidas se denominan moléculas de ADN recombinante .
• 6. En los siguientes dibujos puede verse como actuarían estas enzimas. En este esquema se indica el lugar en el que corta la enzima de restricción. Se aprecia la actuación en ambas hebras. En este esquema se ve el resultado dela actuación de la enzima de restricción. Ha quedado rota la molécula de ADN, quedando unos bordes cohesivos por donde puede unirse este ADN, con otro aunque sea de una especie diferente
• 7. Molécula A Molécula B Digestión de ambas moléculas con la misma enzima de restricción, BamHI Mezclar Tratar con ADN-ligasa ADN recombinante Extremos cohesivos
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• 9. las secuencias de reconocimientode las enzimas de restricción frecuentemente tienen 6 pares de bases. Algunas enzimas como EcoRI y HindIII escinden el ADN dando como resultado extremos “pejagosos”. Las enzimas de restricción generalmente se obtienen de bacterias y su nombre deriva del nombre científico de esas bacterias: Hpal es de Hemophilus parainfluenzae; EcoRI es de E.coli y HindIII es de Hemophilus influenzae
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•11. Sirve para determinar con exactitud el tamaño de una molécula de ADN En la electroforesis, se colocan partículas cargadas en un campo eléctrico y se les permite que migren hacia los polos positivo o negativo. Las moléculas se separan porque se mueven a diferentes velocidades en función de su carga y su tamaño.
• 12. Separación de los fragmentos de ADN (electroforesis)
• 13. Las bandas deADN serán invisibles a menos que el ADN esté marcado o teñido de alguna manera. Un método sensible de tinción del ADN consiste en sumergir el gel después de la electroforesis en el colorante bromuro de etidio que cuando se encuentra unido al DNA, es fluorescente con luz ultravioleta. Para marcar moléculas de ADN aisladas se utiliza la enzima polinucleótido quinasa para transferir un P 32 hasta elextremo 5’ de cada hebra de ADN
• 14. Electroforesis en gel de ADN En la figura (a) se muestra Diagrama de un aparato de gel vertical que muestra sus componentes (b) Equipo comercial de electroforesis en gel. (c) Carril que contiene una serie de fragmentos de ADN de tamaño conocido. Los números indican el número de pares de pases que contiene cada fragmento. Los fragmentos más pequeños sedesplazan una mayor distancia. El gel de la derecha muestra los fragmentos que se originan cuando el fago lambda es digerido con la enzima de restricción Hind III.
• 15. Electroforesis de DNA 20 min
• 16. Secuenciación de una molécula de ADN Se desarrollaron métodos que permitieron determinar de manera simple y rápida la secuencia nucleotídica de cualquier fragmento de ADN purificado. Uno de losmétodos más utilizados es el de Maxam y Gilbert o también conocido como el método químico. Este proceso se inicia con la obtención de un conjunto de moléculas de ADN de doble hebra marcadas en un extremo con P 32. en la primera etapa las hebras de ADN se disocian y se someten a un tratamiento suave con un agente químico que destruye una de las cuatro bases. Solo se destruye una de las bases, al azar....