Citometria de flujo

Citometría de flujo
Se han elaborado métodos para seleccionar células enteras de un determinado tipo a partir de una muestra heterogénea, o bien partes de ellas (como ciertos tipos de cromosomas). Esto puede lograrse, por ejemplo, mediante el uso de cámaras de sedimentación especiales, que funcionan con baja gravedad, en la que se separan las células por su tamaño y densidad. Otros métodosrecurren ala s propiedades de adhesión diferencial de ciertas células a materiales como el plástico, vidrio o matrices artificiales, con recubrimiento de inmunoglobulinas para condicionar esa adhesividad o sin el.
La Citometría de flujo es una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar através de un rayo de luz. Para su análisis por Citometría de flujo, las células deben encontrarse individualmente en suspensión en un fluido. Las células sanguíneas pueden analizarse prácticamente de manera directa, las células de tejidos sólidos deben primero dispersarse. Las células pueden hacerse pasar a muy altas velocidades (pueden llegar a alcanzarse velocidades cercanas a las 100,000 célulaspor segundo).
El uso de moléculas fluorescentes distintas (distintos colores de fluorescencia) permite analizar la presencia de varios marcadores de manera simultánea.
El primer paso de este método consiste en separar alas célula con su asociación con otras células con las matrices, por la cual se recurre a enzimas proteolíticas del tipo de la tripsina o agentes secuestradores del calcio.
Luegose pueden marcar determinadas células o partículas con anticuerpos unidos a colorantes fluorescentes pueden ser separadas de los que no lo son con el seleccionador de células activa por fluorescencia, que detecta por medio de un fino haz de láser la fluorescencia de cada una delas células.
Con las células así obtenidas es posible iniciar cultivos celulares, determinar la fracción marcada sobreel total celular o efectuar diversos estudios morfológicos, biológicos o celulares sobre ambas poblaciones.
ESTRUCTURA BÁSICA DE UN CITÓMETRO DE FLUJO
Esta compuesto por tres partes:
* SISTEMA FLUÍDRICO - Inyección de la muestra.
- Cámara de flujo.
* SISTEMA OPTICO - Fuentes de luz.
- Detectores
* SISTEMA ELECTRICO - Amplificador-convertidor.
- Sistema informático
* SISTEMAFLUÍDRICO: Este sistema consta de dos fluidos, uno que contiene en suspensión a la muestra y otro que lo envuelve a fin de darle estabilidad (sheath fluid). Las células deben pasar una a una por delante del haz del láser. Ambos fluidos (Solución fisiológica, PBS, aire) no se mezclan porque circulan a diferente presión.

* SISTEMA ÓPTICO : Este sistema se compone de dos tipos de ópticas:
* La óptica deexcitación, compuesta de el láser y las lentes para enfocar y dirigir el haz de luz; y
* La óptica de lectura, compuesta por las lentes de recolección de luz emitida luego de la interacción entre el haz del láser y las partículas y el sistema de espejos y filtros para direccionar longitudes de onda específicas hacia los detectores correspondientes.
* FILTROS OPTICOS: Son aquellos queseleccionan las longitudes de onda que deja pasar hacia el detector. Estos pueden ser:
* DE INTERFERENCIA (Dicroicos que reflejan las Long de onda no deseadas);
* DE ABSORCION (absorben las Long de onda no deseada). De éstos hay tres tipos:
* Filtros Band Pass : Dejan pasar un rango de longitudes de onda (Por ej.: 620 – 640 nm)
* Filtros Short Pass: Dejan pasar por debajo de unalongitud de onda determinada ( Por ej.: < 575 nm)
* Filtros Long Pass: Dejan pasar por encima de una longitud de onda determinada (Por ej.: > 520 nm)

SISTEMA ELECTRICO: El sistema electrónico convierte todo en señales digitales para almacenar en la computadora.

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