Cromatografia

Práctica 9:
Cromatografía plana y en columna
Jesús Garrido Cano
Operaciones básicas de laboratorio. Química Analítica
Introducción
La cromatografía es un conjunto de métodos que permite separar los componentes presentes en mezclas complejas.
En todas las separaciones por cromatografía se distinguen dos fases, una móvil y otra estacionaria, que se mantienen en contacto.
El funcionamientoes que al echar la muestra sobre la fase móvil los componentes, se separan según las velocidades con las que se desplazan a través de la fase estacionaria.
Los métodos cromatográficos se pueden clasificar según el tipo de fase móvil o como se disponga la fase estacionaria.
Si la fase estacionaria esta sobre una placa plana, se denomina “Cromatografía en placa plana”, aquí la fase móvil se muevea través de la fase estacionaria por capilaridad.
Luego está la cromatografía en columna, si la fase estacionaria esta en un tubo estrecho y la fase móvil se hace pasar por el tubo a través de la acción de la gravedad o por presión.
Si la fase móvil es liquida será una cromatografía de líquidos, si es un gas tendremos Cromatografía de gases y si la fase móvil es un fluido supe críticotendremos la Cromatografía de fluidos supercríticos (SFC).
Cromatografía plana
En este tipo, la muestra se disuelve en el disolvente adecuado que nos permita depositarla sobre la placa. A continuación se hace pasar la fase móvil que va separando cada uno de los componentes, los cuales avanzan por capilaridad a través de la fase estacionaria. De esta manera se obtienen manchas coloreadascorrespondientes a cada componente que nos permiten obtener el cromatograma.
(En ocasiones estas manchas no son coloreadas, por lo que requieren ser reveladas mediante un reactivo adecuado.)
Tanto los soportes (fase estacionaria) como los disolventes (fase móvil) se deben elegir con cuidado.
- Los soportes no deben ser de malla gruesa (puesto que retienen muy mal) ni de malla excesivamente pequeña (puestoque separan con excesiva lentitud).
- Además, han de ser insolubles en el disolvente empleado y además químicamente inertes, tanto con respecto a las sustancias que se pretenden separar como a los propios eluyentes.
En cuanto a los disolventes, éstos deben posibilitar el avance de los distintos componentes de la muestra a diferente velocidad
El parámetro característico de cada uno de loscomponentes de la muestra es Rf, el cual se define como la relación entre la longitud recorrida por el componente de la mezcla y la longitud recorrida por el eluyente.

Cromatografía en columna
En la cromatografía en columna la fase estacionaria está empaquetada dentro de un tubo de diámetro estrecho
-Inicialmente una disolución de muestra en la fase móvil se introduce en la columna.
-Acontinuación adicionamos fase móvil (eluyente) y los componentes de la muestra se separarán en función de la distinta velocidad con la que cada componente desciende por la columna debido a fenómenos de solubilidad, adsorción, etc… entre los componentes de la muestra y la fase móvil y la fase estacionaria.
A través de la columna se pasará la cantidad suficiente de fase móvil para que cada componente llegueal extremo final de la columna donde puedan ser recogidos

Parte experimental
1-. Separación de los componentes de un extracto
Vegetal
Cortaremos unas muestras de hojas de espinacas y unos trozos pequeños con unas tijeras.
Empezamos con la zanahoria, le echaremos 5 mililitros de acetona y empezaremos a aplastarla en un mortero para obtener el extracto.Echaremos en la cámara cromatográfica 2ml de etanol y 3 ml de tolueno, lo dejaremos reposar para que se sature de eluyente el volumen de la cámara.
Cogeremos unos trozos de hojas de espinacas y la trituraremos. Después echaremos los 5 ml de acetona
Prepararemos la placa cromatográfica, le pondremos a 1 cm del final de la placa un par de gotas del extracto de espinaca y en la parte derecha 3 gotas...