Cultivo Histolytica

Practica No. 16
Medio de cultivo para el aislamiento e identificación de Entamoeba histolytica

Tipo de práctica: Equipo
OBJETIVOS
* Preparar un medio de cultivo de molibdopterina (MPT) para Entamoeba histolytica.
* Observar E. histolytica en un cultivo MPT.
INTRODUCCION
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento ensustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son:temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microrganismo contaminante.
La E. histolytica es un protozoo perteneciente a la familia Entamoebidae, descubierta en 1875 por Lösch en las heces de un ruso que presentaba disenteríagrave, este parasito causante de la amebiasis que es una infección que se manifiesta a nivel intestinal y extra intestinal ya que es invasiva y recurrente,
E. histolytica ocupa el primer lugar de los protozoos entéricos que atacan al hombre.
MATERIAL
* Asa de siembra
* Tubos de 16x 150 mm con tapón de rosca
* Mechero
* Matraz Erlenmeyer de 250 ml.
* Vasos de precipitados* Gradillas.
REACTIVOS
* Acido ascórbico
* Peptona de caseína
* Extracto de levadura
* NaCl
* L-cisteína
* Citrato férrico de amonio
* D- glucosa anhidra
* K2HPO4
* KH2PO4
* NaOH
* Agua bidestilada
* Tinción de giemsa
MUESTRA BIOLOGICA
* Materia fecal
EQUIPOS
* Potenciómetro
* Autoclave
* Balanza analíticaPROCEDIMIENTO PARA EL MEDIO MPT
1) Se miden 0.5 gramos de peptona de caseína
2) Se pesan 2.5 gramos de levadura
3) Se pesan 0.5 gramos de NaCl
4) Se pesan 0.5 gramos de L-cisteína
5) Se pesan 0.5 gramos de acido ascórbico
6) Se pesan 0.25 gramos de fosfato monopotasico (KH2PO4)
7) Se pesan 0.5 gramos de fosfato acido de potasio (K2HPO4)
8) Se pesan0.000142 gramos de citrato férrico de amonio
9) Se pesan 5 gramos de D-glucosa anhidra
10) Se mezclan todos los componentes en un vaso de precipitados.
11) Se afora a 250 ml con agua bidestilada
12) Se ajusta el pH a 7 con NaOH
13) El medio se coloca en alícuotas de 10 ml en tubos de 16x con tapón de rosca
14) Se esteriliza en autoclave por 15 minutos a 121 c
15) Sealmacena en la obscuridad a 4 c hasta su empleo
16) Se adiciona 1 ml de suero de bovino y 0.1 Ml de solución de penicilina-estreptomicina, bajo condiciones asépticas.
17) Se toma el asa de siembra con la materia fecal y se inocula en el medio.
18) Después se incuba a 37 c por 72 horas, después se coloca el agua-hielo por 20 min. Y agitar 10 veces.
19) Tomar una muestra y se tiñecon giemsa
20) Se observa al microscopio




RESULTADOS


BIBLIOGRAFIA
* Respuesta inmune en infecciones por E. histolytica, facultad de medicina e instituto de patología infecciosa experimental. Universidad de Guadalajara, Guadalajara, Jalisco , México. L. Ortiz-Ortiz y M.L. Avellana
CUESTIONARIO
1. ¿Durante que periodos de tiempo un cultivo de E. histolytica debeser analizado?
Se revisan microscópicamente a las 24, 48 y 72 horas, tomando una gota del sedimento que se forma en el fondo del bisel para buscar trofozoito, generalmente un cultivo positivo aparece a más tardar a las 48 horas.
2. ¿Cuál es la fase infectante de E. histolytica?
El quiste tetra nucleado










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