Ensayos bioquimicos para detectar bacterias

Actividades bioquímicas de las bacterias

Práctica de Laboratorio
1. Introducción
2. Objetivos
3. Metodología
4. Resultados
5. Bibliografía
INTRODUCCIÓN
La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes.
Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados, llamadaspruebasbioquímicas convencionales, generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.
Existen diferentes sistemasque facilitan la realización de tales ensayos, porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de ungrupo bacteriano, porque simplifican la interpretación de un resultado utilizando un valor numérico, porque proveen los reactivos prontos para su uso o porque son totalmente automatizables.
Las pruebas o ensayos bioquímicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímicacomo presencia o ausencia de una determinada actividadenzimática, grupo de enzimas o determinada vía metabólica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, etc. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano.
OBJETIVOS
GENERAL
Determinar la producción de enzimas en las bacterias.
ESPECÍFICOS
• Determinar la producción de catalasa de algunos géneros y especies de bacterias.• Determinar la producción de ureasa de algunos géneros y especies de bacterias.
• Determinar la producción de indol de algunos géneros y especies de bacterias.
• Determinar la lucuación de la gelatina de algunos géneros y especies de bacterias.
• Determinar la hidrólisis del almidón de algunos géneros y especies de bacterias.
• Determinar la capacidad oxidativa y/o fermentativa de algunosgéneros y especies de bacterias.
METODOLOGÍA
MATERIALES:
• Géneros y especies
• Cultivos puros de:
a. Peptona
b. SSR
c. Hugh y Leifson
d. Gelatina
e. Triptona
• Cajas de petri
• peróxido de hidrógeno (H2O2)
• reactivo de Kovac’s
• lugol
• parafina
• tira de papel de acetato de plomo
• Tubos de ensayo
• portaobjeto
• Agujas de asa
• Mecheros de alcohol
• Nevera
PROCEDIMIENTOProducción de Catalasa:
1. Coloque una azada de crecimiento (célula) de cada uno de los cultivos sobre portaobjetos.
2. Agregue 2 ó 3 gotas de peróxido de hidrógeno (H2O2)
3. observe la formación o no de burbujas.
Producción de ureasa:
1. incube en los tubos con medio SSR, que contiene urea.
2. Incube a temperatura ambiente y observe los cambios de colordurante 7 dias.
Licuación de lagelatina:
1. inocule los cultivos en tubos con gelatina nutritiva.
2. incube a 37°C. Mantenga la incubación de 2 a 7 días o hasta que se obtenga una reacción positiva.
3. Para observar la hidrólisis, enfríe los tubos en hielo. La gelatina hidrolizada permanecerá liquida.
Producción de indol:
1. inocule los cultivos en tubos con caldo nutritivo.
2. incube a 37°C por 48 horas.
3. Al cabo deeste tiempo, añada en los tubos 0.5 ml del reactivo de Kovac’s.
4. Mezcle bien por rotación del tubo entre las manos y examine después de un minuto.
Hidrólisis del almidón:
1. inocule los cultivos en caja de petri con agar-almidón e incube a 30°C durante 5 días.
2. Al cabo de este tiempo, cubra las cajas con solución de lugol.
3. Observe el color que toma el medio.
Prueba O/F(oxido-fermentación):
1. Medio de cultivo Hugh y Leifson con glucosa al 1%.
2. indicador de acidez o alcalinidad: Bromotimol azul, coloración amarilla indica pH6 o menos; coloración azul indica pH de 7 a 8.
3. De cada cultivo inoculese por el método de punción dos tubos con el medio indicado, uno de ellos sin sellar (condiciones aeróbicas) y el otro sellado con parafina (condiciones anaeróbicas).
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