GUIA DE Q

QUIMICA ANALITICA III
LABORATORIO
G U IA
DE
TRABAJOS PRACTICOS
FARMACIA – Q. INDUSTRIAL

Prof. F. Sonia L. Fretes L.
Jefe de Trabajos Prácticos
Año: 2015

QUIMICA ANALITICA III- LABORATORIO
CROMATOGRAFIA
La cromatografía es un método por el cual las sustancias se separan mediante un
proceso de migración diferencial en un sistema que consta de dos fases. Una fase que
fluye continuamente en unadirección dada (fase móvil) y otra que permanece fija (fase
estacionaria). En estos sistemas los componentes de una mezcla pueden presentar
diferentes movilidades debido a diferencias en la capacidad de adsorción, partición,
solubilidad, presión de vapor, tamaño molecular o carga. Los mecanismos de
separación son: adsorción, disolución y partición, filtración y permeación o tamices
moleculares,intercambio iónico.
Las técnicas aplicadas mediante los distintos mecanismos mencionados empleados son:
Cromatografía en columna, Cromatografía en papel, Cromatografía en capa delgada,
Cromatografía de gases, Cromatografía líquida de alta eficacia y Cromatografía de
exclusión.
La Cromatografía de adsorción se basa en la separación de un soluto entre la fase
estacionaria constituida por un adsorbente,como por ej., alúmina activada, sílica gel y
resinas de intercambio iónico y la fase móvil constituida por el solvente de elución.
La Cromatografía de partición se basa en la distribución selectiva del soluto entre la
fase estacionaria y la fase móvil. Se clasifica en cromatografía de partición en fase
normal y cromatografía de partición en fase reversa. En la cromatografía de partición en
fasenormal las sustancias a separar se distribuyen entre dos líquidos inmiscibles uno de
los cuales es más polar, actúa como fase estacionaria y se encuentra adsorbido sobre
un soporte sólido, brindando una gran superficie de contacto a la fase móvil menos
polar.
En la cromatografía de partición en fase reversa la fase estacionaria es menos polar que
la fase móvil. El grado de partición de un compuestodado entre las dos fases líquidas
se expresa por su coeficiente de partición o de distribución y puede modificarse
variando la composición de la fase móvil.
La Cromatografía de intercambio iónico se emplea para separar compuestos ionizables y
solubles en agua. Las fases estacionarias empleadas son generalmente resinas
orgánicas sintéticas. Las resinas de intercambio catiónico contienen sitiosactivos con
carga negativa y se emplean para separar compuestos básicos, como por ej., las
aminas. Las resinas de intercambio aniónico tienen sitios activos con carga positiva para
la separación de compuestos ácidos, corno por ej., fosfatos, sulfonatos o carboxilatos.
Los compuestos iónicos o ionizables, solubles en agua, son atraídos a las resinas y las
diferencias en la afinidad producen laseparación cromatográfica. El pH de la fase móvil,
la temperatura, el tipo de ion, la concentración iónica y los modificadores orgánicos
afectan el equilibrio; estas variables pueden ajustarse para obtener el grado de
separación deseado.
La Cromatografía por tamices moleculares se basa en el intercambio repetido de los
compuestos con la fase móvil y con la fase líquida estacionaria que se encuentra dentrode los poros del material de relleno.
Empleo de Sustancias de referencia en ensayos de identificación - En Cromatografía en
papel y en Cromatografía en capa delgada, la relación entre la distancia recorrida por
una sustancia y la distancia recorrida por el frente de la fase móvil, se denomina
relación de frente, Rf de la sustancia.
En el caso de la Cromatografía en papel se han observadodiferencias en el valor de Rf
cuando los cromatogramas se desarrollan en dirección paralela a las fibras de papel en
comparación con los desarrollados en forma perpendicular a dicha dirección. En
consecuencia, la orientación de las fibras del papel en lo que se refiere al flujo de la
fase móvil debe ser la misma para una serie de cromatogramas.
Los valores absolutos de Rf , son difíciles de establecer,...