Histologia inmunofluorescencia.
La técnica histológica es una serie secuencial de pasos a través de los cuales una
muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.
II.OBJETIVOS
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III.MARCO TEORICO
FIJACION:
La fijación es una operación destinada a “matar” las células, conservándolas, cuanto sea posible en el estado en que están durante lavida.
Una buen a fijación debe:
inmovilizar la célula
conservar exactamente todas las partes constitutivas.
no hacer aparecer artificialmente otros detalles en la estructura.
Los mejores fijadores son los que además de actuar rápidamente producen el menor numero posible de reacciones (modificaciones) secundarias o artificios, capaces de darnos una idea muy falseada de la morfologíainterna de la célula. Un tejido bien fijado mostrará células plenas, no vacuolizadas, ni hinchadas, ni arrugadas, sino presentando muchos detalles de estructura fina.
Cualidades de los fijadores:
Potencia o poder de penetración: al menos en lo que concierne a los tejidos de manera que el
líquido pueda fijar muy bien las zonas más profundas e igualmente las capas superficiales.
El fijadordebe producir una coagulación total de los albuminoides, pero esto no quiere decir
que la coagulación haya de ser violenta e instantánea, por el contrario, conviene que la
coagulación sea en cierto modo fraccionada para evitar las contracciones.
Agentes fijadores:
Los agentes fijadores pueden ser de orden físico o de orden químico.
Agentes Físicos:
Frío:
No puede ejercer ninguna acciónfijadora a temperaturas que no pasen de 0° C. Endurece los tejidos y suspende las alteraciones celulares debidas a la necrosis y a la autodigestión.
Calor:
Ejerce La fijación por agua hirviendo o por diversos fijadores en ebullición presta servicios para invertebrados y búsquedas histoquímicas.
Agentes químicos:
Ácido acético: Incoloro, cristalizable por debajo de 17° C. Aumenta elcontraste entre núcleo y citoplasma. Forma parte de la mayoría de las mezclas fijadoras como fijador de la cromatina.
Alcohol metílico: Reactivo importante en la técnica de frotis desecados.
Formaldehído: Es un fijador importante a causa de su poder coagulante y su notable capacidad de penetración.
DESHIDRATACION:
Los tejidos contienen grand es cantidades de agua, tanto intracelular comoextracelular, que
debe ser eliminada y reemplazada por parafina.
INCLUCION:
La parafina es un hidrocarburo no cíclico. A la temperatura ambiente es sólido. La
temperatura suave la disuelve por completo. Una temperatura mayor de 65° llega a disolverla,
produciéndose vapores de olor desagradable, inflamables y también tóxicos. Hay parafinas que
funden a distintas temperaturas, para la mayoríade los trabajos pueden utilizarse las que lo hacen a
56-58°. En la estufa debe haber cuatro vasijas con parafina ya disuelta. En cada vasija ha de haber
un volumen suficiente como para cubrir por completo las piezas que se han de colocar. Es
conveniente que cada vasija posea su número de orden 1, 2, 3 y 4.
El recipiente número 1 debe tener parafina ya fundida a la que se mezclará una pequeñacantidad de
solvente, el 2 y 3 deben contener parafina pura, que poco a poco ira adquiriendo algo de solvente
cuando las piezas vayan pasando por ellas.
El 4 debe tener parafina completamente pura.
Pasos de la inclusión:
Se ha de preparar tantos moldes cuantas piezas han de incluirse.
Se extrae una pieza, se la libera de la envoltura de gasa, se la ubica en el fondo del molde,
orientándolapara saber luego por donde ha de ser cortada.
Sobre la pieza puesta en el molde se vierte parafina fundida, pura de la cuarta vasija. Se deja el
molde sobre una superficie plana y fría, se espera que la falta de calor solidifique toda la parafina,
formándose así un bloque. Mientras se trabaja en una pieza las demás deben estar en la estufa.
Los moldes:
Los hay de varias clases: barras de...
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