in vitro
Páginas: 5 (1092 palabras)
Publicado: 2 de marzo de 2014
MEDIO DE CULTIVO IN VITRO
INTRODUCCIÓN
El cultivo in vitro (término que literalmente significa en vidrio), incluye diferentes técnicas destinadas a multiplicar, entre otros, material vegetal o animal. No es exactamente lo mismo que la fecundación in vitro en humanos. El cultivo de tejidos vegetales consiste en tomar una porción de la planta (explanto) y proporcionarle artificialmenteun medio de cultivo nutritivo esterilizado, que permita regenerar una o muchas plantas (Frid, 2009).
El cultivo in vitro es un método de propagación de plantas de aplicación profesional, puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estériles y con unas instalaciones especiales (Cultivo in vitro de árboles frutales).
La reproducción de plantas por cultivo de tejidos es posiblegracias a que las células vegetales son toti potenciales. Esto significa que las células vegetales poseen la capacidad de desarrollar un nuevo individuo completo, sin que sea necesaria la unión de células sexuales. Es decir que a partir de unas pocas células, se puede obtener un organismo completo, de forma asexual (Frid, 2009).
La producción de plantas mediante micro propagación tiene un ampliouso comercial debido a que posee varias ventajas. Como se realiza en un laboratorio, bajo condiciones controladas, no de pende de las condiciones climáticas o de las estaciones. Utiliza un espacio reducido con el potencial de generar miles de plantas en un corto tiempo. Puesto que se trata de un tipo de propagación vegetativa, las características genéticas de las plantas resultantes se mantienen ytodas las plantas serán genéticamente iguales. Por último, al realizarse en condiciones asépticas, la sanidad(o ausencia de patógenos en los tejidos de las plantas) es controlada adecuadamente. Además de la micro propagación, las técnicas in vitro permiten estudiar una serie de fenómenos o procesos con posibles aplicaciones en el mejoramiento genético de las plantas (Malue, 2012).
.
OBJETIVOPropagar plantas, para obtener plantas libres de virus, para conservar la diversidad genética de una población, entre otras aplicaciones.
MATERIALES
- Autoclave
- Cámara de flujo laminar
- Medio de cultivo
- Planta
- Cámara de cultivo
METODO
Preparación del medio MS (Murashige y Skoog).
Se prepararán las placas con medio de cultivo sólido. En primer lugar se procederá a la preparación de500 mL de medio de cultivo líquido. Las sales inorgánicas (macro nutrientes y micronutrientes) vienen mezclados en un preparado comercial (Sigma, M-5524). En un vaso de precipitado que contenga aproximadamente 400 mL de H2O desionizada, se disuelven 2.15 g del preparado comercial. Seguidamente se añaden 15 g de sacarosa y 0.5 g de mio-inositol. Una vez disueltos los solutos, la disolución seajusta a pH 6.0 y se enrasa el volumen a 500 mL. En una botella de 1 se echan 4 g de Phytogel y se vierte con cuidado los 500 mL del medio que se ha preparado. Se autoclavan en ciclo corto 121ºC a 105 kPa durante 20 min. Una vez autoclavados los medios, se tienen que enfriar hasta alcanzar unos 60ºC.
Cuando ha alcanzado la temperatura adecuada, se procede a la adición de los componentes termolábilesque han sido esterilizados previamente por filtración. Se añaden los correspondientes volúmenes de las disoluciones stock: vitaminas 0.5 mL, fitohormonas o kanamicina. Se homogeniza la mezcla y se llenan las cajas petri.
Se procederá a recolectar los tejidos a cultivar in vitro de plantas de zanahoria, papa. Se cortarán secciones de tallo y hojas con bisturí.
Esterilización
Se añade 15-20 mL deetanol 70%, agitando suavemente durante 3 min. Se enjuaga el tejido con agua estéril y se lava el tejido con otros 15-20 mL de la disolución esterilizadora durante 5 min. Para eliminar la lejía, se lava el tejido con tres volúmenes de H2O desionizada estéril, trabajando siempre cerca del mechero.
Una vez esterilizado el tejido, y trabajando con presteza y mucho cuidado, se cortarán más...
MEDIO DE CULTIVO IN VITRO
INTRODUCCIÓN
El cultivo in vitro (término que literalmente significa en vidrio), incluye diferentes técnicas destinadas a multiplicar, entre otros, material vegetal o animal. No es exactamente lo mismo que la fecundación in vitro en humanos. El cultivo de tejidos vegetales consiste en tomar una porción de la planta (explanto) y proporcionarle artificialmenteun medio de cultivo nutritivo esterilizado, que permita regenerar una o muchas plantas (Frid, 2009).
El cultivo in vitro es un método de propagación de plantas de aplicación profesional, puesto que se realiza en laboratorio, en unas condiciones estériles y con unas instalaciones especiales (Cultivo in vitro de árboles frutales).
La reproducción de plantas por cultivo de tejidos es posiblegracias a que las células vegetales son toti potenciales. Esto significa que las células vegetales poseen la capacidad de desarrollar un nuevo individuo completo, sin que sea necesaria la unión de células sexuales. Es decir que a partir de unas pocas células, se puede obtener un organismo completo, de forma asexual (Frid, 2009).
La producción de plantas mediante micro propagación tiene un ampliouso comercial debido a que posee varias ventajas. Como se realiza en un laboratorio, bajo condiciones controladas, no de pende de las condiciones climáticas o de las estaciones. Utiliza un espacio reducido con el potencial de generar miles de plantas en un corto tiempo. Puesto que se trata de un tipo de propagación vegetativa, las características genéticas de las plantas resultantes se mantienen ytodas las plantas serán genéticamente iguales. Por último, al realizarse en condiciones asépticas, la sanidad(o ausencia de patógenos en los tejidos de las plantas) es controlada adecuadamente. Además de la micro propagación, las técnicas in vitro permiten estudiar una serie de fenómenos o procesos con posibles aplicaciones en el mejoramiento genético de las plantas (Malue, 2012).
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OBJETIVOPropagar plantas, para obtener plantas libres de virus, para conservar la diversidad genética de una población, entre otras aplicaciones.
MATERIALES
- Autoclave
- Cámara de flujo laminar
- Medio de cultivo
- Planta
- Cámara de cultivo
METODO
Preparación del medio MS (Murashige y Skoog).
Se prepararán las placas con medio de cultivo sólido. En primer lugar se procederá a la preparación de500 mL de medio de cultivo líquido. Las sales inorgánicas (macro nutrientes y micronutrientes) vienen mezclados en un preparado comercial (Sigma, M-5524). En un vaso de precipitado que contenga aproximadamente 400 mL de H2O desionizada, se disuelven 2.15 g del preparado comercial. Seguidamente se añaden 15 g de sacarosa y 0.5 g de mio-inositol. Una vez disueltos los solutos, la disolución seajusta a pH 6.0 y se enrasa el volumen a 500 mL. En una botella de 1 se echan 4 g de Phytogel y se vierte con cuidado los 500 mL del medio que se ha preparado. Se autoclavan en ciclo corto 121ºC a 105 kPa durante 20 min. Una vez autoclavados los medios, se tienen que enfriar hasta alcanzar unos 60ºC.
Cuando ha alcanzado la temperatura adecuada, se procede a la adición de los componentes termolábilesque han sido esterilizados previamente por filtración. Se añaden los correspondientes volúmenes de las disoluciones stock: vitaminas 0.5 mL, fitohormonas o kanamicina. Se homogeniza la mezcla y se llenan las cajas petri.
Se procederá a recolectar los tejidos a cultivar in vitro de plantas de zanahoria, papa. Se cortarán secciones de tallo y hojas con bisturí.
Esterilización
Se añade 15-20 mL deetanol 70%, agitando suavemente durante 3 min. Se enjuaga el tejido con agua estéril y se lava el tejido con otros 15-20 mL de la disolución esterilizadora durante 5 min. Para eliminar la lejía, se lava el tejido con tres volúmenes de H2O desionizada estéril, trabajando siempre cerca del mechero.
Una vez esterilizado el tejido, y trabajando con presteza y mucho cuidado, se cortarán más...
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