informe hidrolisis de almidon

HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN: ANÁLISIS ENZIMÁTICO DE DIASTASA
Autor(es): Castro Gordillo M.
Corporación Tecnológica de Bogotá; Tecnología en Regencia de Farmacia
Bogotá, Colombia
29 de Octubre de 2014
RESUMENEn esta practica se realiza la hidrolisis del almidón en donde se hace el análisis cinetico de diastasa 2% en solución de NaCl 0.1%, en varios tubos de ensayo se prepararon diferentessoluciones (Tabla 1), luego se le adiciono 1ml de tartrato de cobre y 1ml s/n de Arseno molibdato, después se centrifugo por 3 minutos a 2000 revoluciones por min; se midió la absorbancia en un espectrofotómetro genesys a una longitud de onda de 620 nm, para así determinar la velocidad inicial y la concentración del sustrato para luego realizar la grafica de Michaelis Menden y Lineweaver - BurkPalabrasclaves: Hidrolisis, sustrato, velocidad, enzima, almidón, diastasa, concentración.ABSTRACTIn this practice the hydrolysis of starch wherein the kinetic analysis of diastase 2% in NaCl 0.1%, at various test tubes different solutions (Table 1) were prepared is performed, then was added 1 ml of copper tartrate and 1ml s / n Arsenomolibdato, then was centrifuged for 3 minutes at 2000 revolutions perminute; The absorbance was measured in a spectrophotometer at a Genesys wavelength of 620 nm, to determine the initial velocity and substrate concentration and then make the graph Menden Michaelis and Lineweaver - Burk
Keywords: Hydrolysis, substrate, velocity, enzyme, starch, diastase concentration.
INTRODUCCIÓNEl almidón es el principal polisacárido de reserva de la mayoría de los vegetales, yla principal fuente de calorías de la mayoría de la Humanidad. Es importante como constituyente de los alimentos en los que está presente
El almidón puede ser hidrolizado por acción de amilasas o por ácidos orgánicos.
Lo que llamamos almidón no es realmente un polisacárido, sino la mezcla de dos, la amilosa y la amilopectina. Ambos están formados por unidades de glucosa.
En la amilopectina, lasramificaciones aparecen cada 20 o 30 glucosasLas enzimas son, generalmente, moléculas proteícas que tienen la capacidad de catalizar reacciones químicas. Debido a la naturaleza proteíca, son inestables y pueden ser desnaturalizadas por cambios en el medio.
El alfa-amilasa degrada el almidón en una mezcla de disacáridos: maltosa, maltotriosa trisacárido, la cual contiene tres α (1-4)-residuos deglucosa y oligosacáridos conocidos como dextrinas, que contienen la α (1-6)- ramas de glucosa.
Concentraciones relativas de E y S: la concentración de sustrato [S], es mucho mayor que la de E, de tal manera que la cantidad de substrato unido a la enzima en cualquier momento es muy pequeña. La constante de Michaelis (Km) es característica de cada enzima y su sustrato particular, refleja laafinidad de la enzima por dicho sustrato; la Km es numéricamente igual a la concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad máxima de la enzima, (1/2 Vmax.).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Resultados
34290073660
Tabla No. 2 Absorbancias de los tubos.
BB + BS = 0.032
Tabla No. 3 Tabla concentración de sustrato vs Velocidad inicial
Tabla No. 4 Tabla 1/S vs 1/ VoAbsorbancia – 0.032 = [] µM
T1. 0.042 - 0.032 = 0,01µM
T2. 0.044 - 0.032 = 0,012 µM
T3. 0.047 - 0.032 = 0,015 µM
T4. 0.055 - 0.032 = 0,023 µM
T5. 0.066 - 0.032 = 0,034 µM
T6. 0.080 - 0.032 = 0,048 µM
T1. 0,01µM300s= 3.33E-5µM/sT2. 0,012 µM300s=4.00E-5µM/sT3. 0,015 µM300s=5.00E-5µM/sT4. 0,023 µM300s=7.66E-5µM/sT5. 0,034 µM300s=1.13E-4µM/sT6. 0,048 µM400s=1.20E-4µM/sGráfica No1. Gráfica Michaelis Menten
Lineweaver - Burk
1/ Vo
1/0.00014= 7142,85714
1/ 0,00014667= 6818,02686
1/ 0,00015667= 6382,84292
1/ 0,00018333= 5454,64463
1/ 0,00022= 4545,45455
1/ 0,00026667= 3749,95313
1/(S)
1/ 0,01= 100
1/ 0,012= 83,3333333
1/ 0,015= 66,6666667
1/0.023= 43,4782609
1/0.034= 29,4117647
1/0.048= 20,8333333
Gráfica No 2. Gráfica Lineweaver Burk
Ecuación de Michaelis...