Manual De Tinciones

TINCION DE GRAM:
La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrollo la técnica en 1884.
Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacióna la diferenciación bacteriana, considerándose bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color morado y bacterias Gram negativas a las que se visualizan de color rosa o rojo.
COLORANTES UTILIZADOS EN ESTA TINCIÓN:
Cristal violeta: penetra en todas las células bacterianas tanto Gram positivas como Gram negativas a través de la pared bacteriana.
Yodo lugol: compuesto formado poryodo en equilibrio con kl (yoduro de potasio), el cual está presente para solubilizar y actúa como mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana.
Alcohol- acetona: sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo yodo/cristal violeta. Los organismos Gram positivos no se decoloran, mientras que los Gramnegativos si lo hacen.
Safranina: se utiliza para poner de manifiesto las células Gram negativas, para ello se utiliza una coloración de contraste, habitualmente es un colorante de color rojo (safranina).
Después de la coloración de contraste las células Gram negativas son rojas, mientras que las Gram positivas son moradas.

TÉCNICA DE TINCIÓN
1.- colocar una pequeña cantidad de muestra en unportaobjetos.
2.- con ayuda de un asa bacteriológica se realiza el extendido de la muestras
3.- se deja secar a temperatura ambiente
4.- se fija la muestra tres veces en el mechero
5.- agregar cristal violeta durante 1 minuto

6.- enjuagar con agua corriente

7.- agregar yodo lugol durante 1 minuto

8.- enjuagar con agua corriente

9.- agregar alcohol- acetona al 50% por 40 segundos10.- enjuagar con agua corriente

11.- agregar safranina durante 40 segundos

12.- enjuagar con agua corriente

13.- dejar secar a temperatura ambiente
14.- observar al microscopio
Preparación de los colorantes:
Yodo lugol: se prepara disolviendo 10 gramos de yoduro de potasio en 100 ml de agua destilada y luego se añaden 5mg de yoduro.
Cristal violeta: se prepara añadiendo 13,87gramos (o más) de tinte a 100 ml de alcohol etílico de 95%, se deja reposar la mezcla por 2 días removiendo con frecuencia; filtre y almacene.
Safranina: se prepara con 3,41 gramos de tinte añadido a 100ml de alcohol etílico de 95%. Se deja reposar por 2 días removiendo con frecuencia. Filtre antes de almacenar.
alcohol-acetona: disolver 500ml de alcohol etílico al 95% en 300 ml de acetona. Mezclar yembasar.
TINCIÓN GIEMSA:
Se emplea en hematología para observar los elementos sanguíneos normales y en microbiología para identificar parásitos (protozoarios de la sangre y los tejidos), espiroquetas, levaduras y hongos (chlamydia).
Esta tinción se usa principalmente en frotis sanguíneos para observar los patógenos junto a las células sanguíneas y mostrar las diferencias entre ambos. Estasdiferencias pueden ayudar al diagnostico certero de varias enfermedades infecciosas de la sangre.
En esta tinción se puede observar
Citoplasma (rosa)
Núcleos (azul)
Eritrocitos (rojo)
Bacterias (azul)
Parásitos (azul)

TÉCNICA DE TINCIÓN:
1.- Depositar una gota de sangre en un extremo del portaobjetos
2.- Se realiza el extendido de la muestra, colocando un segundo portaobjetos pordelante de la muestra, con una inclinación de 45° respecto al que contiene la muestra, se realiza el deslizamiento hacia el extremo donde se encuentra lo gota de sangre.

3.- Se deja secar a temperatura ambiente

4.- fijar el frotis con alcohol metílico absoluto durante 3 minutos

5.- preparar en un tubo de ensayo una solución con una porción de 1:9 con Giemsa y tampón PBS (1 ml de Giemsa y 9ml...