quimica

Química Analítica III

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

FUNDAMENTOS

Las muestra se
disuelven en una
fase móvil (FM)
líquida que se hace
pasar a través de
una fase
estacionaria (FE)
inmiscible, la cual se
mantiene fija en una
columna o lecho
cromatográfico

Los componentes de
la muestra se
distribuyen de modo
distinto entre la FM
y FE dependiendo
de la afinidad por
ambas fases,desplazándose a
velocidad distinta

Debido a la distinta
movilidad, los
componentes se
separan en bandas
discriminadas que
pueden analizarse
cualitativamente y/o
cuantitativamente

Eluyente: lo que entra
en la columna
Eluato: lo que sale de
la columna
Elución: proceso de
paso de la FM a
través de la columna

FUNDAMENTOS

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS
CROMATOGRÁFICOS
TIPOFASE ESTACIONARIA

INTERACCIÓN

Adsorción

Sólido

Fuerzas de van der
Waals

Intercambio iónico

Resina

Electrostáticas

Exclusión

Gel

Tamaño de
partículas

Partición

Líquido

Solubilidad

Afinidad

Sólido

Retenciones
bioespecíficas

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS
CROMATOGRÁFICOS

Según el mecanismo de separación

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOSCROMATOGRÁFICOS

CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN
La FE líquida está retenida por
un soporte sólido.
Los soportes sólidos más
utilizados en CLL son: gel de
sílice, tierra de diatomeas
(Kieselguhr, Celita, etc.) y
celulosa.
Dificultad en relación con el
soporte sólido: presencia de
fenómenos de
adsorción(siempre muestra algo
de actividad superficial).

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN
La FE es unsólido adsorbente de
gran área superficial.
Los centros activos situados sobre la
superficie del sólido interaccionan
con los grupos funcionales polares de
los compuestos a separar.
La separación se produce como
consecuencia de la distinta
intensidad de esas interacciones
para los diferentes compuestos.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO (CII)
Se basa en el equilibrio de los
iones desoluto entre el solvente
y los sitios cargados en la FE.

La FE consta de una matriz (R)
con grupos funcionales
cargados (A) y contraiones de
carga opuesta (M), susceptibles
de intercambiarse con especies
de la misma carga contenidas
en la FM (X)

R–A– M+ + X+ ↔ R–A–X+ + M+
(intercambio catiónico)
R–A+M– + Y– ↔ R–A+Y– + M–
(intercambio aniónico)

CROMATOGRAFIA DE EXCLUSIONMOLECULAR
(CPG)
Se aplica fundamentalmente para
la separación y caracterización de
sustancias de peso molecular
elevado.
Se utiliza extensamente en
Bioquímica para separar moléculas
grandes como proteínas e hidratos
de carbono, si bien, también
encuentra aplicaciones en la
química de los polímeros.

CROMAROGRAFÍA LÍQUIDA
Por qué se produce la distribución del soluto entre las
dos fases?Debido a la interacción, en diferente proporción, de las
moléculas de soluto con las moléculas de cada fase
Fuerzas intermoleculares:
iónicas

polares
INTENSIDAD DECRECIENTE

dispersivas

FUERZAS INTERMOLECULARES

Fuerzas
iónicas:

• atracción electrostática de iones con carga opuesta
para separar aniones se requiere una FE catiónica y
viceversa

Atracciones
polares:

•puede tratarse de interacciones de moléculas polares
(alcoholes, cetonas, aldehídos) o polarizables (benceno,
tolueno, naftaleno)
• Para su separación se requerirá que la FM sea no polar o
poco polar y la FE sea polar

Interacciones
dispersivas:

• se originan entre cadenas hidrocarbonadas y sustancias
polares como consecuencia de asimetrías electrónicas
instantáneas

PRINCIPIOS BÁSICOSCROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN
(CLAR O HPLC)

EVOLUCIÓN DE LA CL
a) CL convencional. b) HPLC con partículas peliculares. c) HPLC con partículas
microporosas.

OPTIMIZAR LA CL
El primer aspecto considerado fue incrementar la velocidad
de la fase móvil
Utilización de bombas adecuadas y conexiones de tubos
que impidan fugas, al estar sometido el líquido a
presiones...