RADIOINMUNOENSAYO (RIA)

RADIOINMUNOENSAYO (RIA)
El radioinmunoensayo (RIA) se basa en la competencia que se establece, para unirse a anticuerpos específicos, entre la sustancia a cuantificar y cantidades conocidas de la misma sustancia marcada con un isótopo. Al establecerse esta competición resulta que a mayor cantidad de sustancia a cuantificar, menor será la cantidad de sustancia radiactiva que se une al anticuerpoy viceversa .
Este tipo de reacción se encuentra esquematizado en la Figura 17.11. Los resultados se obtienen al medir la radiactividad de la hormona marcada unida al anticuerpo y la de la hormona marcada libre mediante un contador de centelleo. Al centrifugar, la hormona libre queda en solución y la hormona unida al anticuerpo forma agregados fácilmente precipitables.
Una vez medida laradiactividad se construye una curva con los resultados obtenidos con cantidades conocidas de hormona sin marcar y marcada. A esta curva se llevan los valores obtenidos de los sueros problema y se obtiene la concentración de la hormona no marcada a investigar.
En el RIA directo, a la fase sólida se une una cantidad conocida de Ac. Diferentes concentraciones conocidas de antígeno marcado se incuban conuna concentración constante de la muestra de la que se desea conocer la concentración del antígeno en cuestión.
El fundamento y la detección no sufrirían cambios respecto lo anteriormente comentado. El RIA de inhibición también sería una técnica competitiva de análisis pero lo que se une a la fase sólida es una cantidad fija de antígeno.
Para el proceso de inhibición se incuba una concentraciónfija de anticuerpo marcado frente a una serie de diluciones de la muestra que contiene el antígeno.
Existe una técnica no competitiva que es el denominado sandwich: Se une un Ac en cantidades constantes a la fase sólida. Una vez realizado el bloqueo, se añade el antígeno en concentraciones variables. Posteriormente se añade un segundo anticuerpo contra el antígeno, pero esta vez marcado.

Técnicacuantitativa basada en la competición que se establece entre un antígeno, marcado radiactivamente, y el mismo antígeno no marcado por unirse a un anticuerpo específico.
El principio general del RIA es la INHIBICIÓN COMPETITIVA de la unión de un Ag radioactivo, conocido como trazador, a sus Ac específicos por parte del Ag no marcado:
Ac + Ag* Ac-Ag*
Ac + Ag Ac-Ag
Cuanto mayor sea la cantidadde Ag no marcado presente, menor será la cantidad de trazador que se une al Ac. La cantidad de trazador libre se determina mediante recuento en un contador de centelleo líquido o en un contador gamma, que mide el tipo y la cantidad de radiación emitida.

Se puede determinar la concentración de un Ag en el suero con suficiente especificidad y sensibilidad, si el marcador es lo suficientementeradiactivo, y se puede colocar en concentraciones infinitesimales, y si el Ac es altamente específico. Se usa para determinar hormonas, Ac anti DNA, etc.
RIA Directo
El RIA se basa en la competencia existente entre el antígeno no marcado y una cantidad conocida del antígeno marcado para formar los complejos AgAc o Ag*Ac. Con estos tres componentes (Ag, Ag* y Ac) puede realizarse el ensayo en elque manteniendo constante la cantidad de Ag* y Ac se observará que a mayor cantidad de Ag menos Ag* queda unido a la cantidad fija de Ac (y por tanto menos radiactividad), lo que permitirá relacionar la radiactividad con la concentración de Ag.
1. Se obtienen anticuerpos específicos, para ello se inyectan en un animal pequeñas cantidades en varias dosis del antígeno muy purificado. El animalgenerará anticuerpos que podrán ser recogidos del plasma sanguíneo.
2. Se marca el antígeno radiactivamente. El antígeno marcado debe seguir siendo reconocible por el anticuerpo.
3. Se añaden Ac a una placa de titulación y quedan unidos al soporte sólido, tras lo que se agrega el Ag* en cantidad conocida y el Ag de la muestra problema.
4. Se elimina el antígeno no unido por decantación y lavado,...