recuento de globulos blancos

PRACTICA No.5: "RECUENTO DE LEUCOCITOS"

CUENTA DE LEUCOCITOS
OBJETIVO
Aprender a realizar y aplicar la metodología para un recuento de Leucocitos por milímetro cúbico de sangre e interpretar el resultado.
FUNDAMENTO
Para el conteo de leucocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:  Dilución de la sangre
  Muestreo de la sangre diluida en un volumen
  Recuento de células en ese volumen
Para el recuento de leucos se cuentan los 4 cuadrados de las esquinas, que corresponden a los  campos 1, 3,7 y 9.
Para su dilución, se hace lo mismo que para los hematíes pero empleando la pipeta de blancos, de modo que la solución que obtenemos es de 1/20. Se utiliza como diluyente ellíquido de Turk. El líquido de Turk es hipotónico de modo que se destruyen los hematíes y así no entorpecen en el recuento.
El líquido de Turk consta de ácido acético glaciar 2ml, violeta de genciana disolución de 1% 1ml y agua destilada en cantidad suficiente para 1000ml. Deberá filtrarse a menudo para evitar levaduras y hongos.
En un principio es un poco difícil distinguir los leucocitos de losrestos de membranas de los hematíes hemolizados. Se debe tener en cuenta que los leucocitos son más refringentes (más brillantes) al moverlo con el microscopio que los restos de hematíes. Se debe observar la presencia de la membrana citoplasmática y de la membrana nuclear (a veces más) como líneas finas y brillantes. Esto se observa fácilmente moviendo el microscopio hacia delante y hacia atrásMATERIAL
  Pipeta de Thoma para glóbulos blancos (perla blanca)
  Equipo para venopuncion (Tubo lila)
  Boquilla blanca
  Tubo de goma
  Tubos de ensayo
  Papel parafilm
  Cámara de Neubauer
  Cubrehematimetro
  Microscopio
  Gasas
SUSTANCIAS
  Alcohol al 70%  
  Sangre venosa
  Liquido de Turk 

PROCEDIMIENTO
1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcoholal 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2.    Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.    Llenar la pipeta de glóbulos blancos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/20. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente4.    Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (liquido de Turk) y absorber hasta la marca 11, no deben quedar burbujas.

5.    Se tapan ambos extremos de la pipeta con papel parafilm y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos

6.    Montar la laminilla de vidrio en la cámara para recuento. Debe estar limpia y seca.
7.    Destapar lapipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente.

8.    Dejar 3 minutos  que los leucocitos se sedimenten

9.    Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. y contar  en los 4 cuadrados angulares.
10. En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentroo por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.
OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando uno de los cuadros laterales, se aprecian claramente los 16 cuadros pequeños donde se tienen que contar los leucocitos que hay en ellos. Se debe de tener cuidado de no confundir los restosde eritrocitos hemolizados con los leucocitos, que deben de aparecer como puntos purpuras o negros, como los que están a las 9

RESULTADOS
Los recuentos de leucocitos, al igual que los eritrocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los glóbulos blancos de los 4 cuadrados...