Tecnicas Inmunologicas

FACULTAD DE MEDICINA HUMANA
2011-II
UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO


GRUPO N º 03


DR. GUSTAVO ANTEPARRA PAREDES
INMUNOLOGIA
2011-II
UNPRG-FMH

GRUPO N º 03


SEMINARIO N 02 TECNICAS INMUNOLOGICAS

TECNICAS INMUNOLOGICAS

1.ANTICUERPOS MONOCLONALES:
Los anticuerpos monoclonales son aquellos anticuerpos, todos iguales (químicamente homogéneos), producidos por unacélula inmortal productora de anticuerpos.

1.1.Aspectos generales de la producción de hibridomas
Para producir anticuerpos monoclonales específicos frente a determinados antígenos, se siguen tres etapas básicas:

* Inmunización del animal con un antígeno
* El antígeno tiene que presentar dos características para poder ser utilizado en la inmunización; tiene que ser purificado einmunogenico.
* Suele hacerse una primera inmunización seguida de dosis de recuerdo (colocadas en semanas o meses).
* Vías de inmunización utilizadas: subcutánea, intraperitoneal e intravenosa.
* Si la cantidad de antígeno es poca o este es poco inmunogenico, se puede inmunizar en el bazo o nódulo linfático.
* El seguimiento del proceso se hará en lapsos determinados detiempo.
* Si el antígeno es pequeño, se le acopla un carrier o potenciadores en la respuesta inmunogenica del animal (adyuvantes)
* Se coloca al animal un último refuerzo de fusión 3 días antes de su sacrificio.

* La fusión celular
* entre: linfocitos B (células del bazo del animal inmunizado); serán estas células las que le brinden la característica de productora deantígenos, y las células tumorales (mieloma) que le otorgara la inmortalidad y la proliferación a la célula fusionada (HIBRIDOMA).
* requisitos de la célula tumoral (mieloma): ausencia de producción de Ig propia, mitosis rápidas; inductoras de fusión celular, poseer los marcadores necesarios para seleccionar las células fusionadas.
* Selección de hibridomas: un hibridoma está formadoun linfocito B mas una célula tumoral, ambos fusionados; pero no todos los linfocitos van a fusionarse con las células tumorales; por lo tanto tenemos que seleccionar solamente a las células fusionadas, es decir a los hibridomas, para esto se utiliza un medio con un sustrato para una enzima codificada por un gen del linfocito B; entonces todas las células que no posean el gen que codifica laenzima para el sustrato perecerán, así las primeras en perecer son las células tumorales no fusionadas (por no presentar el gen para la enzima); luego los linfocitos perecen porque aun presentando el gen su tiempo de vida máximo en un cultivo es de solo 10 días; por lo tanto solamente obtenemos en el cultivo hibridomas que pudieron sobrevivir gracias al gen suministrado por el linfocito B.
*La fusión celular se realiza 3 o 4 días después de la ultima inoculación del antígeno
* La fusión es ayudada por el polietilglicol.

* Ensayos de especificidad frente al antígeno
* Es el punto más critico en la producción de anticuerpos monoclonales.
* Características de las técnicas utilizadas: sensibles, rápidas, simples, automatizadas y que brinden un controlpositivo y negativo.
* Técnicas utilizadas: radioinmunometricas y enzimoinmunimetricas.
* Los cultivos que sean positivos a la reacción deben ser clonados rápidamente.
* Algunas de las células pueden perder un cromosoma y originar un cultivo biclonal o multiclonal.
* Los cultivos biclonales ocasionan la pérdida de capacidad para producir anticuerpos en una célula productoraoriginalmente buena.

1.2Producción de anticuerpos

* In vivo: se obtiene mg/ml de liquido ascítico
* In vitro: se obtiene µg/ml de sobrenadante de cultivo

1.3Purificación de anticuerpos

Es la separación de anticuerpos de: proteínas, fluidos biológicos o componentes del medio de cultivo mediante métodos cromatograficos (métodos físicos de separación de mezclas complejas)....