tecnicas inmunologicas

Técnicas inmunológicas
1. INTERACCIÓN ANTÍGENO-ANTICUERPO.- La unión antígeno-anticuerpo es una interacción reversible en la que están involucrados enlaces no-covalentes. En la interacción in vitro de un antígeno con su correspondiente anticuerpo se distinguen dos etapas, la interacción primaria no visualizable y la interacción secundaria, que sigue a la anterior y se caracteriza por laaparición de un fenómeno visible como la aglutinación o la precipitación.
2. INTERACCIÓN SECUNDARIA ANTIGENO-ANTICUERPO.- Las técnicas inmunológicas que evidencian la interacción Ag-Ac a través de una reacción secundaria son, generalmente, más económicas y sencillas que aquellas que permiten visualizar la interacción primaria.
2. a. Reacciones de precipitación Al mezclar cantidades suficientes de Agsoluble con Acs específicos, la interacción Ag-Ac puede dar lugar a una red capaz de ser visualizada como un precipitado. Esa red de la que hablamos, no es otra cosa que grandes complejos inmunes formados por la interacción Ag-Ac. Tal como se observa en la figura, cuando se agregan concentraciones crecientes de Ag soluble a una cantidad fija de suero conteniendo Acs específicos, a medida que lacantidad de Ag agregado aumenta, la cantidad de precipitado se incrementa hasta alcanzar un máximo, luego del cual declina. En un extremo de la curva de precipitación, cuando se agregan pequeñas cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ac. En el otro extremo, al agregar grandes cantidades de Ag, los CI se forman en exceso de Ag siendo pequeños y probablemente constituidos por una molécula de Acy dos de Ag. Entre estas dos situaciones extremas se encuentra la zona de equivalencia, en donde la relación Ag-Ac permite la formación de grandes redes de CI que precipitan.
La reacción de precipitación depende de la VALENCIA del Ac y del Ag. La valencia del Ac da idea del número de sitios que posee para reconocer al Ag. De esta manera, un Ac bivalente posee dos sitios capaces de reconocer alAg. Del mismo modo, la valencia de un Ag nos habla del máximo número de epitopes que posee. Para que se pueda producir la interacción secundaria Ag-Ag con la consecuente formación del precipitado, tanto el Ag como el Ac deben ser, al menos, bivalentes.
La asociación entre Ac bivalentes y Ag multivalentes permite la formación de CI precipitantes. El Ag multivalente puede presentar un sóloepitope repetido o varios epitopes distintos.
La asociación entre Ac bivalentes y Ag monovalentes (un único epitope no repetido) no permite la formación de CI precipitantes.
2. b. Técnicas inmunológicas basadas en reacciones de precipitación.
1- Inmuno Difusión Radial (IDR)

Esta técnica permite cuantificar de manera sencilla y económica inmunoglobulinas de isotipo G, M y A o antígenossolubles presentes en muestras biológicas. La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico. La muestra biológica se introduce en los orificios cilíndricos excavados en el agar y a medida que el antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relación Ag-Ac que permite la formaciónprecipitados visibles. Una vez finalizada la difusión se mide el radio de los precipitados que es proporcional a la concentración de antígeno. La concentración de proteína en la muestra biológica se calcula realizando una curva de calibración utilizando muestras patrones de concentración conocida.
2- Inmunoelectroforesis (IEF).
La inmunoelectroforesis es una técnica cualitativa que permite laidentificación de diferentes componentes proteicos presentes en distintas muestras biológicas (suero, orina, etc) a través de arcos de precipitación. La técnica se realiza preferentemente en geles de agarosa y se distinguen dos etapas:
1) Las muestras se someten a una separación electroforética.
2) Terminada la electroforesis, las proteínas interaccionan con los Acs específicos aplicados en el agar...