Tincion de muestras en el laboratorio

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE TLAXCALA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

LICENCIATURA EN QUIMICA CLINICA

LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR Y TISULAR

OSCAR EDGAR DELGADO GONZALEZ
1º A

ASESOR:
Dr. ESTHELA CUEVAS
OTOÑO 2013
SESION 5. PRÁCTICA No. 4. TINCIONES CELULARES

TÉCNICAS DE COLORACIÓN
Los cortes ya cortados todavía no son aptos para su examen con el microscopio, puesto que lostejidos se hallan infiltrados en parafina o en resina y carecen de color. Los cortes se colocan sobre portaobjetos a los que se les ha agregado una pequeña cantidad de albúmina, gelatina que actúan como adhesivo. La parafina se elimina en un solvente orgánico, de nuevo se incluyen en Xilol, y la muestra se rehidrata haciéndola pasar por una serie de graduaciones decrecientes de alcohol etílicohasta llegar a una solución 100% de agua. Posteriormente se procede a la tinción.
Las estructuras de los tejidos no teñidos tienen más o menos el mismo índice de refracción, por lo cual es difícil reconocerlos. La tinción facilita la visualización de las diferentes estructuras dependiendo de sus características químicas. Un colorante debe colorear las células, no decolorarse son los disolventeshabitualmente empleados y decolorarse mínimamente tras largo tiempo de almacenamiento. En citología es muy importante la calidad de la tinción del núcleo ya que la distinción entre células benignas y malignas se basa en la morfología nuclear. La tinción del citoplasma proporciona información adicional respecto al origen y maduración de la célula.
Existen dos teorías que explican el procedimiento dela coloración
a) Teoría física. Considera que la coloración es un proceso físico de adsorción. Así, las partículas de las sustancias colorantes disueltas penetran en los espacios intra e intercelulares en los que se mantienen adheridas en razón de la cohesión molecular. Por ejemplo, la coloración de las grasas o lípidos es una tinción por adsorción; los Sudanes III o IV tiñen las grasas por lafacilidad que tienen para disolverse en ellas.
b) Teoría química. El colorante se une a la sustancia coloreable combinándose con ella íntimamente debido a la presencia de agrupaciones moleculares ácidas o básicas en los componentes celulares o tisulares que se unen respectivamente a los cromógenos básicos y ácidos de los colorantes, formando sales insolubles. Una prueba de ello es el hecho de lacasi imposibilidad de separar completamente el colorante de los componentes en donde ejerció su acción de tinción, aun empleando sus líquidos solventes. El enlace iónico o electrostático ocurre cuando el colorante y la sustancia que se va a teñir, desarrollan diferentes cargas eléctricas y entonces se atraen una a la otra, por ejemplo, el citoplasma se colorea porque las proteínas citoplasmáticasposeen carga eléctrica positiva y las partículas del colorante tienen carga eléctrica negativa.
Los colorantes ácidos tienen carga eléctrica negativa, por lo tanto la designación correcta es la de colorantes aniónicos. También se les conoce como colorantes citoplasmáticos, pues tiñen al grupo químico, cargado eléctricamente, localizado en un extremo de la cadena de aminoácidos que integran lasproteínas citoplasmáticas. Las sustancias que atraen eléctricamente a los colorantes ácidos se denominan “acidófilas” y químicamente están constituidas por componentes básicos o alcalinos. Ejemplos: la eosina, el amarillo de metanilo, la fucsina ácida, el ácido pícrico, el verde rápido, el naranja G, la safranina, el azul de anilina, etc. Mientras que los colorantes básicos poseen una cargaeléctrica positiva, por lo tanto son colorantes catiónicos. Se les denomina también colorantes nucleares, pues tienen afinidad por los ácidos nucleicos (ADN y ARN). Las sustancias teñidas por los colorantes básicos se denominan “basófilas” y están constituidas por componentes ácidos. Ejemplos: la hematoxilina, el rojo nuclear, el azul de metileno, la tionina, el azul de toluidina, la fucsina básica. Los...