“EL METODO DE BRADFORD PARA LA DETERMINACION COLORIMETRICA DE PROTEINAS”
Páginas: 3 (589 palabras)
Publicado: 15 de mayo de 2014
Practica #
“EL METODO DE BRADFORD PARA LA DETERMINACION COLORIMETRICA DE PROTEINAS”
Introducción:
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica derutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el diagnóstico de enfermedades,así como para otros muchos propósitos.
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas paraabsorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Método de Bradford
Se basa en la unión de un colorante, ComassieBlue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejoproteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 μg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre lassustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.
Objetivo
Al final izar esta sesión práctica el alumno podrá ser capaz de preparar curvas estándar de proteínas usando como modelola ovoalbúmina y comparará la sensibilidad del método respecto al ensayo de Biuret , además será un refuerzo en el uso y operación del espectrofotómetro como instrumento foto colorimétrico, así comoproponer la aplicación de la técnica para diversas situaciones experimentales de su perfil.
Material y reactivos:
Espectrofotómetro Spectronic 20 UV-Vis Reactivo deBradford
2 pipetas de 2 mL Std. Albúmina/Caseina 100 g/mL
8 tubos de ensaye (29X200mm) NaCl 5%
2 buretas de 25 mL...
“EL METODO DE BRADFORD PARA LA DETERMINACION COLORIMETRICA DE PROTEINAS”
Introducción:
Determinar la concentración de proteínas en una muestra biológica es una técnica derutina básica cuando se aborda un esquema de purificación de una proteína concreta, cuando se quiere conocer la actividad específica de una preparación enzimática, para el diagnóstico de enfermedades,así como para otros muchos propósitos.
Existen diferentes métodos para la cuantificación de proteínas. Muchos de estos métodos se basan en: a) la propiedad intrínseca de las proteínas paraabsorber luz en el UV, b) para la formación de derivados químicos, o c) la capacidad que tienen las proteínas de unir ciertos colorantes.
Método de Bradford
Se basa en la unión de un colorante, ComassieBlue G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida, existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la forma azul para formar un complejoproteína-colorante con un coeficiente de extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 μg), simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación. Entre lassustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones básicas.
Objetivo
Al final izar esta sesión práctica el alumno podrá ser capaz de preparar curvas estándar de proteínas usando como modelola ovoalbúmina y comparará la sensibilidad del método respecto al ensayo de Biuret , además será un refuerzo en el uso y operación del espectrofotómetro como instrumento foto colorimétrico, así comoproponer la aplicación de la técnica para diversas situaciones experimentales de su perfil.
Material y reactivos:
Espectrofotómetro Spectronic 20 UV-Vis Reactivo deBradford
2 pipetas de 2 mL Std. Albúmina/Caseina 100 g/mL
8 tubos de ensaye (29X200mm) NaCl 5%
2 buretas de 25 mL...
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