Determinaciòn De Proteinas Por El Metodo De Lowry Y Bradford

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

LABORATORIO DE MÈTODOS DE ANÀLISIS


PRACTICA:
DETERMINACIÒN DE PROTEINAS POR EL METODO DE LOWRY
DETERMINACIÒN DE PROTEINAS POR EL METODO DE BRADFORD

FECHA DE ENTREGA:
31- AGOSTO – 2012

Objetivos
* Separar los aminoácidos presentes en jugo de frutos por cromatografía bidimensional en capa fina
*Identificar los aminoácidos separados por comparación de sus valores de Rf con los de soluciones tipo de aminoácidos
* Comparar el grado de resolución de la cromatografía bidimensional, con el de la unidimensional
Introducción
La cromatografía en capa fina es un método que se basa en la separación de las moléculas absorbidas a una capa muy delgada de gel de sílice, mediante el flujo de unacolumna de solvente que se deja ascender mediante capilaridad.
Para identificar los distintos compuestos, los cuales se separan por solubilidades, la fase móvil a lo largo de la fase estacionaria, se obtiene su Rf esto es el frente de la mancha sobre el frente del solvente y se comparan.
El Rf es una manera de indicar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal, mide laretención de un componente.
En una cromatografia bidimensional se utilizan 2 fases moviles, una despues de la otra, en la primer fase movil se van a separar mezclas de compuestos las cuales daran una mancha, en estas mezclas pueden haber 2 o mas componentes, los cuaes van a eluir en la segunda fase movil que se desplazara en otra direccion (90°).
Cálculos y valores de Rf`s
Tabla 1. Cromatogramasunidimensionales y aminoácidos de la muestra
aminoácido | 1° fase móvil | 2° fase móvil | muestra 1° fase movilRf1 | Aminoácido correspondiente | muestra Rf2 | Aminoácido correspondiente |
| Rf1 | Rf2 | 0.038 | ---- | 0.048 | Thr |
Arg | 0.202 | 0 | 0.256 | Lis | 0.189 | Gly |
Lis | 0.225 | 0 | 0.397 | ---- | 0.31 | Pro |
Pro | 0.5 | 0.364 | 0.448 | Pro | 0.378 | Thr |
Gly |0.544 | 0.216 | 0.512 | ---- | 0.5 | Met |
Glu | 0.587 | 0.635 | 0.551 | Gly | 0.0594 | Lis |
His | 0.687 | 0.067 | 0.653 | His | 0.729 | Tyr |
Thr | 0.75 | 0.3972 | 0.743 | Thr | 0.918 | --- |
Tyr | 0.78 | 0.6164 | 0.833 | Phe | | |
Met | 0.787 | 0.554 | | | | |
Phe | 0.825 | 0.602 | | | | |

Grafica 1. Es la interpolación de Rf de la muestra con los Rf delos aminoácidos tipo

Tabla 2. Cromatograma bidimensional tipo y muestra
Aminoácido | 1° fase móvil | 2° fase móvil | Muestra | Muestra | | |
| Rf1 | Rf2 | | Rf1 | Rf 2 | ------- |
Arg | 0.24 | 0.04 | 1 | 0.3 | 0 | Arg |
Lis | 0.316 | 0.039 | 2 | 0.41 | 0.039 | Lis |
Pro | 0.5375 | 0.2894 | 3 | 0.437 | 0.519 | ------- |
Gly | 0.6125 | 0.306 | 4 | 0.448 | 0.168 | ------- |Glu | 0.712 | 0.6 | 5 | 0.5 | 0.259 | Pro |
His | 0.7375 | 0.1081 | 6 | 0.55 | 0.486 | Gly |
Thr | 0.753 | 0.4459 | 7 | 0.7 | 0.573 | Thr |
Tyr | 0.8 | 0.6351 | 8 | 0.784 | 0.3108 | Tyr |
Met | 0.83 | 0.589 | 9 | 0.887 | 0.5657 | Met |
Phe | 0.912 | 0.625 | | | | |

Grafica 2. Interpolación de los aminoácidos tipo con muestra de jugo de jitomate, en donde se aprecianque algunos puntos coinciden, esto quiere decir que .probablemente sean los aminoácidos tipo utilizados.

Discusión
En la cromatografía bidimensional problema se pudieron identificar algunos aminoácidos contenidos en el jugo de jitomate, aunque los cromatogramas mostraron otro tipo de manchas que no correspondían con los aminoácidos tipo, esto es debido a que solo se utilizaron 10 aminoácidostipo y no había forma de identificar estos aminoácidos en el cromatograma
Se utilizaron las cromatografías unidimensionales para comparar los Rf`s de los aminoácidos tipo en las 2 fases móviles, para identificar en la muestra problema los Rf`s de este e identificar los aminoácidos presentes en la muestra problema (jugo de jitomate).
Se utilizo la ninhidrina debido a que sirve para la...