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Identificación de bacterias mediante tinción Gram y sistema API20E
Stephanie Bello, Gloriann M. Soto
Pontificia Universidad Católica de Puerto Rico, Recinto de Mayagüez.
Departamento de Ciencia, Curso: Microbiología.
Email: glouni@live.com; sram.sram8@yahoo.com

Resumen:
El objetivo de esta investigación fue aprender a utilizar diferentes métodos de identificación de bacterias, determinar quebacterias hayamos en una muestra de humus de lombriz. En estos experimentos vemos dos tipos de identificación bacteriana la primera que es tinción Gram negativa y positiva donde al ser analizada encontramos cocos y bacilos positivos y negativos, la segunda es identificación por medio del sistema API20E donde identificamos la bacteria Alcaligenes spp. es género microbiológico de bacteriaGram-negativa.
Abstract:


Materiales:
Utilizamos laminillas, cubre-objeto, platos petris, capsula API20E, aguja de inocular, mechero, tubos de ensayo, cinta de parafina, microscopio, autoclave, incubadora. Los reactivos que utilizamos fueron nutran Agar, agua destilada, tinte cristal violeta, safranina, iodo (Grams iodine) y alcohol.

Procedimientos:
Preparación de agar: Suspender 4.6 g del medio en 200mililitros de agua destilada.
Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto.
Esterilizar en el autoclave a 121o C (15 libras de presión) Durante 15 minutos.
Enfriar a una temperatura entre 45- 50oC y vaciar en los diez platos petris esterilizados.
Al enfriar y endurecer se le aplica la parafina para encubar durante tres a cinco días en un lugar apartado ogaveta.
Recuento Microbiológico: Con la muestra ya preparada en un matraz, se reúne 4 tubos de ensayos con 9 mililitros de H2O destilada.
D el matraz con una pipeta se transfiere 1 mililitro de muestra al primer tubo de ensayo.
Se mezcla por un minuto en el agitador y se transfiere 1mL a dos platros petris utilizando el método pour plate y surface plate identificando los dos platos como 1/1.
Setransfiere 1 mililitro del primer tubo al segundo. Nuevamente se agita por un minuto para homogenizar la mezcla y procedimos a pipetear con otra pipeta estéril se transfiere 1 mililitro a los dos platos petris: pour plate y surface plate identificando los dos platos como 1/10.
Con la misma pipeta se trasfiere 1 mililitros al tercer tubo de ensayo. Se mezcla por un minuto hasta homogenizar, luegocon otra pipeta estéril se tranfiere 1 mililitro de la tercera muestra a los dos platos petris utilizando el método pour plate y surface plate identificando los dos platos como 1/100.
De ahí con la misma pipeta se transfiere 1 mililitro al cuarto tubo de ensayo, nuevamente se lleva al agitador un minuto hasta homogenizar.
Comienza con una pipeta esterilizada a echar 1 mililitro de muestra a los dosplatos petris utilizando el método de pour plate y surface plate identificando los dos platos como 1/1000.
Al pasar de tubo en tubo se va reduciendo la cantidad de bacterias.
Tinción Gram: Limpia bien la laminilla con agua y jabón. Puedes utilizar unas pinzas para calentar la laminilla en el mechero. Y luego colocar una gota de agua destilada. Pasar la laminilla por la flama varias veces muyrápido y esperar que la muestra se seque.
Desinfecta la aguja de inocular en el mechero. Busca el cultivo con los microrganismos. Con la aguja de inocular (desinfectada) obtén una pequeña muestra del cultivo. Transfiere a la laminilla limpia la muestra del cultivo. Desinfecta la aguja nuevamente.
Obtener el cristal violeta y añadir sobre toda la laminilla. Espera por un minuto a que seque un poco eltinte.
Lava la laminilla con agua. Espera que se seque.
Obtener el tinte Grams iodine y colocar sobre toda la laminilla, sobre los microorganismos. Espera por un minuto a que seque un poco el tinte.
Lava la laminilla con agua. Espera que se seque.
Obtener el Alcohol y colocar sobre toda la laminilla, sobre los microorganismos. Espera por un minuto a que seque un poco.
Lava la laminilla con...