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ISSN: 1988-2688
RCCV Vol. 1 (2). 2007

PAPEL DE LAS CÉLULAS INTERSTICIALES EN LA NEUROTRANSMISIÓN
MEDIADA POR ÓXIDO NÍTRICO EN LA URETRA.
María Sancho González
Tutora: Ángeles García Pascual
Dpto. de Fisiología (Fisiología Animal) Facultad de Veterinaria. UCM

INTRODUCCIÓN
Las células intersticiales (ICCs) fueron descritas hace más de 100 años por D.
Santiago Ramón y Cajal, en el tractogastrointestinal, donde regulan la motilidad actuando
como marcapasos

y como mediadoras de la neurotransmisión (Burns et al., 1996).

Recientemente han sido descritas en diferentes estructuras del tracto urinario como uréteres,
próstata, vejiga y uretra (McHale et al., 2006). El músculo liso uretral posee una densa
inervación nitrérgica, productora de óxido nítrico (NO), que es responsable de larelajación de
esta estructura durante la micción (Garcia-Pascual et al., 1991). El presente trabajo se centra
en el estudio de la función de las ICCs como intermediarias en la neurotransmisión nitrérgica;
que se fundamenta en la acumulación de GMP cíclico (GMPc), el mediador biológico del NO,
en respuesta a compuestos donantes de NO, como la S-nitrocisteina (SNC).

MATERIALES Y MÉTODOS
Se utilizaron tirastransversales o anillos aislados de la uretra proximal de ovejas y
ratas Winstar hembras, respectivamente. Su actividad mecánica fue registrada mediante
transductores isométricos (Grass FT03C) conectados a un sistema de adquisición de señales
(MacLab, AD Instruments). Las preparaciones fueron contraídas con noradrenalina (NA, 50
μM) y sometidas a una dosis submáximal de SNC (10-4 M) durante 4 min.Isobutil-metil
xantina (IBMX, 10-4 M) y zaprinast (10-4 M), inhibidores inespecíficos de fosfodiesterasas,
estuvieron presentes desde 30 s antes de la adición de SNC. Además, algunas preparaciones
fueron tratadas con ODQ (10-4 M), un inhibidor selectivo de la guanilato ciclasa.
Preparaciones paralelas no expuestas a SNC, sirvieron como controles. Las preparaciones
recogidas fueron inmediatamentesometidas a un proceso de fijación y crioprotección con
paraformaldehído al 4% y sacarosa (10-30%) durante 24h y cortadas a 10 μm de espesor con
un criostato. Los cortes fueron sometidos a inmunohistoquímica de fluorescencia simple o
doble, mediante el empleo de los siguientes anticuerpos primarios: anti-GMPc, combinado, o
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no, con anti-NO sintasaneuronal (NOSn), como marcador de nervios nitrérgicos; antivimentina, como marcador de ICCs y anti-PGP 9.5 como marcador neuronal inespecífico.

RESULTADOS

Inmunofluorescencia simple con GMPc
La estimulación con SNC originó una intensa inmunoreactividad a GMPc en el
músculo liso y especialmente en ICCs (Figura 1C). La desaparición de la inmunoreactividad
en presencia de ODQ (Figura 1B), demuestra laexistencia de una producción basal de GMPc
(Figura 1A) que se estimula por la adición de SNC. Las ICCs aparecen como células bipolares
(o multipolares) con escaso citoplasma y largos procesos dendríticos (Figura 2), distribuidas
en gran densidad en las capas serosa, muscular y submucosa.

Inmunofluorescencia doble GMPc-vimentina
Se observó una gran densidad de células inmunoreactivas para vimentina anivel
de las capas submucosa, muscular y serosa, con largas prolongaciones que se entrelazan y
conectan unas con otras formando verdaderas redes (Figura 3 A). En la capa muscular, tanto
longitudinal como circular, las ICC pueden ser intramusculares, paralelas a las células
musculares lisas o interfasciculares, rodeando e interconectando fascículos de músculo liso
(Figura 3B). Todas las célulaspositivas para GMPc también lo fueron para vimentina. El
marcaje con GMPc fué mas intenso en los cuerpos celulares, mientras que la vimentina marca
especialmente las largas prolongaciones de estas ICCs (Figura 4).

Inmunofluorescencias doble GMPc-NOSn y GMPc-PGP 9.5
La inmunoreactividad para NOSn y PGP 9.5 se observó en una densa red de
nervios intramurales distribuidos en las capas musculares y...