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21/04/2015

Cromatografía Líquida de Alta Resolución
High-Performance Liquid Chromatography

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Herramienta analítica indispensable.
Laboratorios criminalisticos. (programas de televisiónImposibilidad física de aumentar el flujo.

CSI, La Ley y el orden)

Resinas compresibles.

Diferentes aplicaciones.

Corridas de muchas horas.
Grandes volúmenes.

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Característica Principal
HPLC enFase Normal

HPLC Utiliza una presión elevada para forzar el

Fase estacionaria Polar (enlazada a siloxano con un
grupo funcional polar) y la fase móvil no polar

paso del disolvente por una columnaque

HPLC en Fase Reversa

contiene partículas muy finas, consiguiendo así

Fase estacionaria relativamente no polar, fase móvil
polar

separaciones de gran resolución.

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21/04/2015Disolventes comunes en Fase Reversa
CH3OH

Methanol
• Acetonitrilo

Esta técnica analítica se clasifica de acuerdo a su
mecanismo de separación en cromatografía de:

CH3CN

Reparto
Adsorción
ExclusiónIntercambio iónico
Cromatografía de afinidad
Cromatografía quiral

• Tetrahidrofurano

• Agua

H 2O

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La cromatografía líquida se realizaba inicialmente en columnas de vidrio con
diámetrosinternos de unos 10-50 mm. Las columnas se empaquetaban con
partículas sólidas en una longitud de 50-500 cm, recubiertas con un líquido
adsorbido que formaba la fase estacionaria. Para lograr velocidadesde flujo
razonables con este tipo de fase estacionaria, el tamaño de las partículas de
sólido tenía que ser mayor de 150-200µm, e incluso entonces, en el mejor de
los casos, la velocidad de flujo erade unas décimas de milímetros por
minuto. Los intentos de acelerar este procedimiento clásico aplicando vacío o
presión no resultaron efectivos, ya que el aumento de la velocidad de flujo
generaba unincremento de la altura de plato y la consecuente
Las partículas pequeñas reducen la altura del plato y que la altura del plato
no es muy sensible al incremento de la velocidad de flujo cuando las...