Absorción intestinal de aminoacidos

PRÁCTICA No. 3
ABSORCIÓN INTESTINAL DE AMINOÁCIDOS


INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biomoléculas poliméricas lineales, constituidas por -L-aminoácidos y caracterizadas por ser multifuncionales. (Arboledas, D., (2011). El proceso de absorción intestinal de aminoácidos y pequeños péptidos tienen lugar, sobretodo en el yeyuno e íleon, donde intervienen transportadores que se encuentransituados en las microvellosidades. La absorción en el intestino delgado se basa en general en mecanismos de transporte activo secundario, en contra del gradiente de concentración. (Hernández, M. y Satre. A., 1999). La histidina puede absorberse a nivel gástrico con la presencia de histidina descarboxilasa, de lo contrario es absorbida por el intestino delgado. Cuando se consumen más proteínas de lasnecesarias, el exceso se convierte en glucosa y cetoácidos, que producen triglicéridos; por el contrario, en situación de ayuno, algunas proteínas se degradan y sus aminoácidos son utilizados para producir compuestos esenciales para el organismo. (Teijón, J. et. al., 2006). Los objetivos de la práctica fueron demostrar que los aminoácidos atraviesan la pared del intestino delgado mediante unmecanismo activo de absorción, por medio de un ensayo in vitro; describir los principios de la determinación de aminoácidos por el método colorimétrico utilizando ninhidrina y cuantificar aminoácidos por el método colorimétrico con ninhidrina.


METODOLOGÍA
El modelo in vitro utilizado fue una porción de intestino delgado de rata que al invertirse y luego de ligarse en sus extremos permite disponerde una estructura cerrada (asa) con permeabilidad selectiva. La porción de intestino se sumerge en un gran volumen de una solución amortiguadora fisiológica: la solución de Krebs-Ringer bicarbonato (KRB), permite prolongar la vida de las células. (Garzón, R. et. al., 2010)

La ninhidrina descarboxila y desamina el aminoácido gracias a su poder oxidante, ésta reacciona con una molécula deninhidrina no reducida y con el amoníaco resultante de la desaminación para formar un compuesto complejo que presenta coloración purpura azulada. De esta forma se pueden determinar cuantitativamente los aminoácidos por espectrofotometría (Teijón, J. et. al., 2006) (ver Anexo 4).









RESULTADOS
Gráfica 1. Curva de calibración de histidina

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en elLaboratorio de Bioquímica, Edificio T-12, USAC.
*moles = micromoles

En la Gráfica 1, se representa la absorbancia obtenida, a 535 nm, de diferentes concentraciones de histidina.

Gráfica 2. Concentración de histidina obtenida en moles/mL durante la absorción en el intestino.

Fuente: Datos experimentales, obtenidos en el Laboratorio de Bioquímica, Edificio T-12, USAC.

En la Gráfica 2,se muestra la concentración de histidina, obtenida a partir de la ecuación de la curva de calibración calculada anteriormente.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La solución de KRB tiene una composición similar al líquido extracelular. Es un buffer que mantiene la presión osmótica del tejido. (Plummer, D., 1981). La solución le brinda un ambiente similar al que está adaptado el intestino dentro de larata viva, introducirlo en esta solución sirve para que el intestino continúe trabajando como si se encontrara dentro de la rata, por ello la razón de su uso durante la práctica.
El intestino se voltea para que el transporte se lleve a cabo en un volumen grande, incrementando cualquier absorción que ocurra y haciéndolo más sensible de lo que es cuando funciona dentro de un organismo. Es decir,la inversión permite detectar experimentalmente el transporte fisiológico del aminoácido que se da normalmente los procesos de absorción (Garzón, R. et. al., 2010). La solución de KRB también es utilizada para eliminar los aminoácidos presentes. (Plummer, D., 1981). En este caso se lavó con KRB para asegurarse que en el intestino no permaneciera algún residuo de aminoácido.

La absorción de...