ACIDO LACTICO
Páginas: 13 (3016 palabras)
Publicado: 22 de enero de 2015
15. ÁCIDO LÁCTICO
En presencia de nicotinamida -adenin-dinucleótido (NAD) el ácido láctico total (L-lactato y D-lactato) se oxida a piruvato mediante una reacción que es catalizada por L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) y D-lactato deshidrogenasa (D-LDH).
El equilibrio de la reacción se desplaza en el sentido del lactato. La eliminación del piruvato del medio de reacción desplaza el equilibriohacia la formación de piruvato.
En presencia de L-glutamato, el piruvato se transforma mediante una reacción catalizadora en L-alanina esta reacción catalizadora es llevada a cabo por la glutamato-piruvato-transaminasa (GTP). L-lactato+NAD+piruvato+NADH+H+D-lactato+NAD+piruvato+NADH+H, 3 piruvato+L-glutamato, L-alamina+acetoglutamato.
La formación de NADH que se mide por el muestreo deabsorbancia a una longitud de onda de 340nm es siempre proporcional a la cantidad de lactato presente.
El ácido L-láctico se determina mediante dos reacciones:
El ácido láctico, separado mediante una columna separadora de aniones, pasa a oxidarse a etanol y es determinado por colorimetría después de que halla reaccionado con nitroprusiato y pipesidina.
Reactivos
1.Solución tampón pH= 102.Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor de 40 a 10 y 3M, se disuelven 900g en 30 ml de agua destilada. Se mantiene estable la solución hasta 1 mes aproximadamente a una temperatura de 4 ºC.
3.Suspensión glutamato-piruvato-transaminasa (GPT) de 20 mg/ml.
4.Suspensión de L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) de 5mg/ml.
Material
Espectrofotómetro con mediciones de340nm, máximo de absorción de la NADH.
- Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto óptico.
- Micropipetas.
Proceso
Si la concentración de ácido láctico es menor a 100mg/l, la concentración de lactato se efectúa directamente sobre el vino, pero si no diluir con agua bidestilada.
Determinación del ácido láctico.
La solución tampón se lleva a una temperatura entre 20 a 25 ºC antes deproceder a la dosificación. Se ajusta la longitud de onda a 340nm. Posteriormente se introducen en las cubetas de vidrio las siguientes soluciones:
Una vez preparada la solución muestra y blanco, se mezcla con un agitador de vidrio y pasados unos 5 minutos se miden las absorbancia de la solución blanco y muestra.
Se añaden 0.02 ml de (L-LDH) y 0.05 ml de (D-LDH), se mezcla y se espera a quefinalice la reacción y se miden las absorbancia.
Por último se determina las diferencias de absorbancia para el blanco y la muestra.
Diferencia absorbancia blanco (DAB).
Diferencia absorbancia muestra (DAM).
DA= DAM.DAB determinación del ácido L-láctico y del ácido D-láctico.
La concentración del ácido láctico se expresa en (g/l) con 1 decimal.
Método de cálculo
Fórmula general1. V= volumen total en mml de ácido L-láctico.
2. V= volumen total en mml de ácido D-láctico.
3. v= volumen de la muestra en mml.
4. PM= peso molecular de la sustancia que se va a determinar.
5. EeE= coeficiente de excitación de la NADH a 340nm.
C= 0.164.DA.
16. ÁCIDO L-MÁLICO
Fundamento del método
En presencia de nicotamina-adenin-dinucleótido (NAD) el ácido L-málico(L-malato) se oxida y pasa a oxaloacetato en una reacción catalizada por la L-malato-deshidrogenasa (L-.MDH).
El equilibrio de la reacción se desplaza en sentido de malato. La eliminación del oxalato de la reacción desplaza el equilibrio a la formación de oxaloacetato. En presencia de L-glutamato el oxaloacetato se transforma en L-aspartato, que es una reacción catalizada por (GOT)glutamato-oxaloacetato-transminasa.
(1) L-malato+NAD+oxaloacetato+NADH+H+
La formación de NADH, medida por el aumento de la absorbancia con longitud de onda de 340nm es proporcional a la cantidad de L-malato presente.
Reactivos
1.Solución tampón pH= 10.
2.Solución de nicotamina-adenin-dinucleótido (NAD). Se disuelven 420mg de NDA en 12 ml de agua bidestilada manteniéndolo en solución estable...
En presencia de nicotinamida -adenin-dinucleótido (NAD) el ácido láctico total (L-lactato y D-lactato) se oxida a piruvato mediante una reacción que es catalizada por L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) y D-lactato deshidrogenasa (D-LDH).
El equilibrio de la reacción se desplaza en el sentido del lactato. La eliminación del piruvato del medio de reacción desplaza el equilibriohacia la formación de piruvato.
En presencia de L-glutamato, el piruvato se transforma mediante una reacción catalizadora en L-alanina esta reacción catalizadora es llevada a cabo por la glutamato-piruvato-transaminasa (GTP). L-lactato+NAD+piruvato+NADH+H+D-lactato+NAD+piruvato+NADH+H, 3 piruvato+L-glutamato, L-alamina+acetoglutamato.
La formación de NADH que se mide por el muestreo deabsorbancia a una longitud de onda de 340nm es siempre proporcional a la cantidad de lactato presente.
El ácido L-láctico se determina mediante dos reacciones:
El ácido láctico, separado mediante una columna separadora de aniones, pasa a oxidarse a etanol y es determinado por colorimetría después de que halla reaccionado con nitroprusiato y pipesidina.
Reactivos
1.Solución tampón pH= 102.Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor de 40 a 10 y 3M, se disuelven 900g en 30 ml de agua destilada. Se mantiene estable la solución hasta 1 mes aproximadamente a una temperatura de 4 ºC.
3.Suspensión glutamato-piruvato-transaminasa (GPT) de 20 mg/ml.
4.Suspensión de L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) de 5mg/ml.
Material
Espectrofotómetro con mediciones de340nm, máximo de absorción de la NADH.
- Cubetas de vidrio de 1 cm de trayecto óptico.
- Micropipetas.
Proceso
Si la concentración de ácido láctico es menor a 100mg/l, la concentración de lactato se efectúa directamente sobre el vino, pero si no diluir con agua bidestilada.
Determinación del ácido láctico.
La solución tampón se lleva a una temperatura entre 20 a 25 ºC antes deproceder a la dosificación. Se ajusta la longitud de onda a 340nm. Posteriormente se introducen en las cubetas de vidrio las siguientes soluciones:
Una vez preparada la solución muestra y blanco, se mezcla con un agitador de vidrio y pasados unos 5 minutos se miden las absorbancia de la solución blanco y muestra.
Se añaden 0.02 ml de (L-LDH) y 0.05 ml de (D-LDH), se mezcla y se espera a quefinalice la reacción y se miden las absorbancia.
Por último se determina las diferencias de absorbancia para el blanco y la muestra.
Diferencia absorbancia blanco (DAB).
Diferencia absorbancia muestra (DAM).
DA= DAM.DAB determinación del ácido L-láctico y del ácido D-láctico.
La concentración del ácido láctico se expresa en (g/l) con 1 decimal.
Método de cálculo
Fórmula general1. V= volumen total en mml de ácido L-láctico.
2. V= volumen total en mml de ácido D-láctico.
3. v= volumen de la muestra en mml.
4. PM= peso molecular de la sustancia que se va a determinar.
5. EeE= coeficiente de excitación de la NADH a 340nm.
C= 0.164.DA.
16. ÁCIDO L-MÁLICO
Fundamento del método
En presencia de nicotamina-adenin-dinucleótido (NAD) el ácido L-málico(L-malato) se oxida y pasa a oxaloacetato en una reacción catalizada por la L-malato-deshidrogenasa (L-.MDH).
El equilibrio de la reacción se desplaza en sentido de malato. La eliminación del oxalato de la reacción desplaza el equilibrio a la formación de oxaloacetato. En presencia de L-glutamato el oxaloacetato se transforma en L-aspartato, que es una reacción catalizada por (GOT)glutamato-oxaloacetato-transminasa.
(1) L-malato+NAD+oxaloacetato+NADH+H+
La formación de NADH, medida por el aumento de la absorbancia con longitud de onda de 340nm es proporcional a la cantidad de L-malato presente.
Reactivos
1.Solución tampón pH= 10.
2.Solución de nicotamina-adenin-dinucleótido (NAD). Se disuelven 420mg de NDA en 12 ml de agua bidestilada manteniéndolo en solución estable...
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