AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS:
Páginas: 9 (2183 palabras)
Publicado: 17 de noviembre de 2014
OBJETIVO:
Identificar las especies patógenas de las vías gastrointestinales a través del coprocultivo y de sus reacciones bioquímicas
INTRODUCCIÓN
La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios ( Bacteroides, bácilos grampositivos, estreptococos), microorganismos entéricosgrannegativos y S. faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patogenas de las heces implica la separación de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de transtornos gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas ( de: estafilococos, vibriones, Escherichia coli toxígena), bacilos entéricosgramnegativos invasores, los fermentadores lentos de la lactosa, las Shigellas, las Salmonellas y las campilobacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del mundo.
ESPECIMENES. Las heces y los raspados rectales son los especimenes de que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse la presencia de sangre, moco o helmintos en lainspección somera inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationatoy se cultivan sobre medios ordinarios así como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separación de los bacilos gramnegativos que no ferementan la lactosa de otras bacterias entericas comunes..
Los frotis teñidos pueden revelar unaprevalencia de leucocitos y de ciertos microorganismos anormales como Cándida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para diferenciar las bacterias entéricas patógenas de las de la flora normal.
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO
*Muestra de materia fecal en frasco con tapa.
*Placas estériles de: agar soya tripticaseína, agar EMB, agar endo, agar S-S, agar verde brillante.
*Tubo de 16 x 150 con5 ml de caldo tetrationato.
*Tubo de 16 x 150 con 5 ml de caldo nutritivo estéril.
*Mechero, asa, incubadora.
Al día siguiente:
*Placas con coprocultivo.
*Equipo de coloración de Gram
*Serie de tubos de cultivo para pruebas bioquímicas: Agar Kligler, SIM medium, agar citrato de Simmons, agar manitol, caldo urea, caldo dextrosado, caldo V-P, gelatina, leche descremada, etc..*Mechero, asa, tina, puente, piseta.
*Lámpara de alcohol.
MÉTODO
TOMENSE PRECAUCIONES DE ASEPSIA AL MANIPULAR LOS ESPECIMENES. AL INOCULAR EN LOS TUBOS ES INDISPENSABLE EL USO DE CUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR SIEMPRE FRENTE A LA FLAMA DEL MECHERO
I) AISLAMIENTO.
1) Sembrar una asada de materia fecal sospechosa en el tubo de caldo de tetrationato. Inocular con asa por emulsión.2) De la misma manera sembrar otra asada de la misma muestra en el tubo de caldo nutritivo.
3) Etiquetar con los datos escolares
4) Levar a la incubadora a 37ºC duarnte 24 horas. Colocar los tubos en gradilla de rejilla, de tal manera que se mantengan en posición vertical para evitar que el líquido se derrame.
II) RESIEMBRA.
AL INOCULAR LAS PLACAS, ES INDISPENSABLE EL USO DECUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR FRENTE A LA FLAMA.
1) Retirar los tubos de la incubadora.
2) Disponer sobre la mesa una serie de medios selectivos (agar EMB, agar S-S, agar verde brillante y agar soya tripticaseina) para resembrar el cultivo en caldo de tetrationato.
3) Disponer sobre la mesa una serie de los mismos medios selectivos para resembrar el cultivo en caldo nutritivo.
4) Resembrar encada una de las placas el inóculo correspondiente por la técnica de estrias cruzadas sectoriales. Usar solo una asada para cada placa.
5) Sellar las placas. Etiquetar con los datos escolares
6) Llevar las placas a la incubadora. Colocarlas en posición invertida. Mantenerlas durante 24 horas.
Al día siguiente:
1) Retirar las placas de la incubadora.
2) Efectuar análisis macroscópico...
Identificar las especies patógenas de las vías gastrointestinales a través del coprocultivo y de sus reacciones bioquímicas
INTRODUCCIÓN
La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios ( Bacteroides, bácilos grampositivos, estreptococos), microorganismos entéricosgrannegativos y S. faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patogenas de las heces implica la separación de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de transtornos gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas ( de: estafilococos, vibriones, Escherichia coli toxígena), bacilos entéricosgramnegativos invasores, los fermentadores lentos de la lactosa, las Shigellas, las Salmonellas y las campilobacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del mundo.
ESPECIMENES. Las heces y los raspados rectales son los especimenes de que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse la presencia de sangre, moco o helmintos en lainspección somera inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationatoy se cultivan sobre medios ordinarios así como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separación de los bacilos gramnegativos que no ferementan la lactosa de otras bacterias entericas comunes..
Los frotis teñidos pueden revelar unaprevalencia de leucocitos y de ciertos microorganismos anormales como Cándida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para diferenciar las bacterias entéricas patógenas de las de la flora normal.
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO
*Muestra de materia fecal en frasco con tapa.
*Placas estériles de: agar soya tripticaseína, agar EMB, agar endo, agar S-S, agar verde brillante.
*Tubo de 16 x 150 con5 ml de caldo tetrationato.
*Tubo de 16 x 150 con 5 ml de caldo nutritivo estéril.
*Mechero, asa, incubadora.
Al día siguiente:
*Placas con coprocultivo.
*Equipo de coloración de Gram
*Serie de tubos de cultivo para pruebas bioquímicas: Agar Kligler, SIM medium, agar citrato de Simmons, agar manitol, caldo urea, caldo dextrosado, caldo V-P, gelatina, leche descremada, etc..*Mechero, asa, tina, puente, piseta.
*Lámpara de alcohol.
MÉTODO
TOMENSE PRECAUCIONES DE ASEPSIA AL MANIPULAR LOS ESPECIMENES. AL INOCULAR EN LOS TUBOS ES INDISPENSABLE EL USO DE CUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR SIEMPRE FRENTE A LA FLAMA DEL MECHERO
I) AISLAMIENTO.
1) Sembrar una asada de materia fecal sospechosa en el tubo de caldo de tetrationato. Inocular con asa por emulsión.2) De la misma manera sembrar otra asada de la misma muestra en el tubo de caldo nutritivo.
3) Etiquetar con los datos escolares
4) Levar a la incubadora a 37ºC duarnte 24 horas. Colocar los tubos en gradilla de rejilla, de tal manera que se mantengan en posición vertical para evitar que el líquido se derrame.
II) RESIEMBRA.
AL INOCULAR LAS PLACAS, ES INDISPENSABLE EL USO DECUBREBOCAS Y GORRA. TRABAJAR FRENTE A LA FLAMA.
1) Retirar los tubos de la incubadora.
2) Disponer sobre la mesa una serie de medios selectivos (agar EMB, agar S-S, agar verde brillante y agar soya tripticaseina) para resembrar el cultivo en caldo de tetrationato.
3) Disponer sobre la mesa una serie de los mismos medios selectivos para resembrar el cultivo en caldo nutritivo.
4) Resembrar encada una de las placas el inóculo correspondiente por la técnica de estrias cruzadas sectoriales. Usar solo una asada para cada placa.
5) Sellar las placas. Etiquetar con los datos escolares
6) Llevar las placas a la incubadora. Colocarlas en posición invertida. Mantenerlas durante 24 horas.
Al día siguiente:
1) Retirar las placas de la incubadora.
2) Efectuar análisis macroscópico...
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