Algunas tecnicas para medir analitos

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TECNICAS PARA MEDIR ANALITOS

Quimioluminiscencia
Es el fenómeno que ocurre en las luciérnagas y consiste en:
– Una reacción química con un muy alto rendimiento energético produce una molécula potencialmente fluorescente.
– (No hay excitación luminosa como en la fluorescencia)
– Usualmente son reacciones redox catalizadas por enzimas que involucran O2 o H2O2 y un sustrato orgánicooxidable. La energía se libera como luz visible.
Se utiliza para detectar concentración muy baja de moléculas, menor límite de detección que en los métodos isotópicos y en otros enzimáticos.

Técnica analítica Quimioluminiscente
Para inmunoensayos se marcan Ag o Ac con sustancias que participan en la reacción quimioluminiscente (luminol, peroxidasa), y la quimioluminiscencia es el paso final en ladetección.
Se hacen en fase sólida, o en técnicas homogéneas.
La quimioluminiscencia se define como la emisión de radiación electromagnética (normalmente en la región del visible o del infrarrojo cercano) producida por una reacción química.
Cuando esta emisión proviene de organismos vivos o sistemas derivados de ellos, se denomina bioluminiscencia. Ambos fenómenos son procesos luminiscentes quese han identificado tradicionalmente mediante un prefijo que identifica la fuente de energía responsable del inicio de la emisión de radiación electromagnética.
Como la intensidad de emisión es función de la concentración de las especies químicas implicadas en la reacción quimioluminiscencia, las medidas de la intensidad de emisión pueden emplearse con fines analíticos.
Una ventaja de lastécnicas quimioluminiscencia es que permiten emplear una instrumentación básica bastante sencilla, ya que el sistema óptico no requiere fuente externa de excitación.
Algunas limitaciones en el análisis por quimioluminiscencia, como la dependencia de la emisión quimioluminiscente de varios factores ambientales que deben ser controlados, la falta de selectividad, ya que un reactivo quimioluminiscente nose limita a un único analito, y finalmente, como ocurre en otros sistemas de detección en flujo, la emisión quimioluminiscente no es constante sino que varía con el tiempo (el flash de luz está compuesto de una señal que se produce tras la mezcla de los reactivos, alcanza un máximo y después cae hasta la línea de base), y este perfil de emisión frente al tiempo puede variar ampliamente endiferentes sistemas quimioluminiscentes, por lo que hay que extremar el cuidado para detectar la señal en sistemas en flujo, midiendo en periodos de tiempo bien definidos.
Hay diferentes formas de luminiscencia, distinguiéndose por el mecanismo que la genera.
La fotoluminiscencia también conocida como fluorescente la sustancia es estimulada por fotones de luz, la emisión de la luz con un trazadorfluorescente es diferente.
En bioluminiscencia, una reacción química medida por enzimas es responsable por la excitación, y esta reacción está siempre emparentada a organismos vivos. En quimioluminiscencia, la emisión de luz es causada por los productos de una reacción específica química.

Fluorometría o fluoroscopia.

Utilización del fenómeno de fluorescencia para el estudio de ciertos tejidos,órganos o funciones; por ejemplo, examen de los tegumentos que se han hecho fluorescentes por la acción de los rayos ultravioletas. Por este procedimiento se descubren las alteraciones epidérmicas antes de que sean aparentes con la luz blanca. Después de la inyección de fluoresceína en una vena o en una arteria, permite el estudio de la red vascular con luz ultravioleta.
Características:
Tieneuna muy alta sensibilidad. Es de 100 a 1000 veces más sensible que las técnicas colorimétricas normales.
Las medidas de fluorescencia se expresan en unidades de intensidad relativa, se emplea lo que se llama “Rendimiento de Fluorescencia Relativo”.
La señal electrónica variará para la misma concentración de una sustancia de un instrumento a otro y, por lo tanto, no se podrán comparar.
Las...
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