Amilasa cuantificación

Purificación y cuantificación de alfa-amilasa salival

1Laboratorio de Bioquímica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad Nacional, 2014, Costa Rica.
Resumen
Las enzimas son proteínas globulares responsables de la mayor parte de la actividad química de los organismos vivos. La amilasa es la enzima que fragmenta el almidón en sus componentes, es denominada también ptialina otialina, es una enzima hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples como lo son la glucosa y maltosa. Las enzimas son extremadamente eficientes y se pueden utilizar una y otra vez repetidamente. Una enzima puede catalizar miles de reacciones en cada segundo. El objetivo del presente laboratorio es determinar las proteínas totales de la muestra desaliva por el método de Bradford y además establecer la actividad enzimática de la amilasa a diferentes extractos de enzima. Los resultados se obtuvieron mediante el cambio de color que genera el reactivo de Lugol del azul al rojo cuando se encuentra en la presencia de un oligosacárido simple.
Introducción
La amilasa es la enzima que fragmenta el almidón en sus componentes, es denominada tambiénptialina o tialina, es una enzima hidrolasa que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares simples como lo son la glucosa y maltosa. Los órganos productores de amilasa sérica son: las glándulas salivares; sobre todo en las glándulas parótidas. La amilasa fue la primera enzima en ser identificada y aislada por Anselme Payen en 1833, quien la bautizó en un principiocon el nombre de diastasa. (2)



Figura 1. Vista en tercera dimensión de la enzima salival amilasa.
La amilasa pancreática excretada por el páncreas mediante los conductos de Wirsung y Santorini a la segunda porción del duodeno tiene un pH de 7. Cuando una de estas glándulas se inflama aumenta la producción de amilasa y aparece elevado su nivel en sangre. Se realiza un examen en el torrentesanguíneo que determina los niveles de esta enzima, casi siempre para diagnosticar o vigilar una pancreatitis aguda. También puede detectar algunos problemas del tubo digestivo o deficiencia renal. El rango normal es de 23 a 85 unidades por litro (U/L) pero en algunos laboratorios dan un rango de 40 a 140 U/L. Dichas unidades se pueden definir como la cantidad de amilasa requerida para producirel equivalente a 1 mg de glucosa en 30 minutos a una temperatura de cuarenta grados centígrados.
El almidón es una mezcla de dos polisacáridos, amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%), ambos formados por unidades de glucosa. La amilosa posee una estructura lineal, mientras que la amilopectina es ramificada (figura 2). El almidón está presente en el trigo, la patata, el arroz, el maíz, entreotros, constituyendo así la reserva de energía de la mayoría de vegetales, y es la principal fuente de energía de los alimentos que comemos. Para que el cuerpo humano pueda aprovechar la glucosa del almidón es preciso degradarlo previamente. La saliva humana contiene entre 0 y 3 mg/ml de amilasa, capaz de romper los enlaces que unen las moléculas de glucosa en el almidón.
Figura 2.Estrucurapoligosacárida de la amilopectina.
La alfa-amilasa hidroliza los enlaces α-1,4 del almidón pero es incapaz de hidrolizar los enlaces α-1,6, por lo tanto se requiere de la existencia de otras clases de enzimas que realicen esta función. Se encuentran por ejemplo en la senda intestinal la sacarasa que degrada la sacarosa en glucosa y fructosa de la misma manera la lactosa convierte lactosa en galactosa yglucosa, al final el proceso digestivo es una mezcla de fructosa, galactosa y glucosa. Si alguna de las enzimas mencionadas llega a faltar por problemas congénitos ocurre un desequilibrio metabólico que altera la producción final de ATP y demás subproductos del proceso de la glucólisis.
Procedimiento
El procedimiento llevado a cabo para la purificación y cuantificación de alfa-amilasa salival...