Amilasa de bacillus licheniformis

La influencia de diferentes agentes tensioactivos comerciales sobre la actividad enzimática de una comercial α-amilasa de Bacillus licheniformis (Termamyl 300 L) se ha estudiado. Como tensioactivos no iónicos, poliglicósidos de alquilo (Glucopon ® 215, Glucopon ® 600 y Glucopon ® 650) fueron estudiados, así como alcoholes grasos etoxilados (findet 1214N/23 y findet 10/15), y los etoxilatos denonilfenol (findet 9Q/21.5 NF). También, un tensioactivo aniónico, lineal alquil benceno sulfonato (LAS) fue ensayada. En general, ninguno de los tensioactivos no iónicos estudiados, excepto findet 10/15, variar sustancialmente la actividad enzimática. Findet 10/15 tiene el carácter hidrófobo más fuerte y reduce la actividad enzimática más significativamente mayor será su concentración. En cuanto aLAS, este tensioactivo significativamente deprimido la actividad enzimática, presumiblemente debido a las interacciones electrostáticas causadas por su carácter aniónico.
Hoy en día, amilasas (α-amilasa, y glucoamilasas) representan uno de los grupos enzimáticos más importantes dentro del campo de la biotecnología. Estas enzimas están presentes en numerosas aplicaciones industriales ybiotecnológicas, incluyendo en formulación de detergentes. El uso de enzimas en detergentes ofrece ventajas múltiples desde el punto de vista ambiental: ahorro de energía en bajas temperaturas de lavado, sustitución o reducción de otros componentes perjudiciales para el medio, falta de efectos negativos en los sistemas de aguas residuales y tratamiento de aguas y la ausencia de riesgo para la fauna acuática.Uno de los principales problemas que afectan la acción de estas enzimas en la formulación de detergentes es la posible influencia de tensioactivos por hidrólisis enzimática, debido a la posible interacción de los tensioactivos tanto con la reacción sustrato, así como la enzima.
Con respecto al sustrato, en el caso del almidón, este es conocido como amilasa, principalmente, y en menor grado laamilopectina puede interactuar con tensioactivos, dando lugar a complejos de inclusión. La formación de estos complejos entre los tensioactivos y el almidón puede obstaculizar la hidrólisis enzimática con amilasas, en consecuencia, se ha confirmado que la formación de complejos con amilosa surfactante impide la hidrólisis enzimática con β-amilasa siendo solo parcialmente hidrolizable.
Con respecto ala enzima, muchos tensioactivos que interactúan con proteínas puede presentar en su estructura diferentes cargas eléctricas y los diferentes grupos hidrófobos e hidrófilos que alteren las estructuras secundaria y terciaria de las proteínas. En particular, muchas enzimas son inestables en soluciones de agentes tensioactivos aniónicos, tales como dodecil sulfato sódico (SDS), dodecil bencenosulfonato de sodio y éter sulfato de sodio (Tanaka y Hoshino, 1999; Tanaka y Hoshino, 2002). Además, la formación de micelas también puede afectar a la cinética enzimática. Se ha demostrado que las velocidades de hidrólisis de la amilosa por α-amilasa de Bacillus amyloliquefaciens y Bacillus licheniformis varían en presencia de SDS; la velocidad de reacción aumenta a concentraciones inferiores a laconcentración crítica de micelas del tensioactivo, y disminuye durante este nivel, siendo este efecto menos pronunciado en la enzima de Bacillus licheniformis que en la enzima de Bacillus amyloliquefaciens (Tanaka y Hoshino, 2002).
Tabla 1. Concentración micelar crítica, el equilibrio hidrófilo-lipófilo, y el contenido de humedad de los tensioactivos comerciales diferentes ensayadas.

Además,algunas enzimas son más estables en presencia de tensioactivos no iónicos que en la presencia de tensioactivos aniónicos. La formación de micelas de tensioactivos aniónicos pueden alterar la conformación de la proteína debido a la existencia de fuertes interacciones electrostáticas e hidrófobas entre las micelas y de las proteínas (Montserret et al 2000;.. Hagihara et al 2002). Por el contrario, los...