anabolismo y catabolismo de proteinas





















































TÉCNICAS DE CULTIVO Y CUANTIFICACIÓN
DE MICROORGANISMOS
























































































PROCEDIMIENTO

El docente explicará los principiosgenerales de trabajo, para la realización de las técnicas de de cultivo, así como su manejo en condiciones asépticas, proporcionara cepas para la inoculación, así como muestras problema. Desinfectar el área de trabajo con solución de benzal o alcohol y encender los mecheros.


METODO DE DILUCIONES

1. Marcar del 2 al 5 una serie de tubos de 16 x 150 mm con 9 ml de agua destilada estéril.
2.Agregar 10 g o 10 ml de la muestra al matraz que contiene 90 ml de agua destilada estéril, homogenizar la suspensión y dejar sedimentar las partículas gruesas.
3. Efectuar la transferencia de 1 ml solución del matraz al tubo marcado con el número dos.
4. Efectuar diluciones decimales, como se indica a continuación:


Tubo
Transferencia

Agua ml
Dilución
1
10 g 0 10 ml de muestra
+
90
10-12
1 ml del matraz 1
+
9
10-2
3
1 ml del tubo 2
+
9
10-3
4
1 ml del tubo 3
+
9
10-4
5
1 ml del tubo 4
+
9
10-5



Notas
a) Homogeneizar la suspensión en cada tubo antes de transferir el volumen al siguiente tubo.
b) Cambiar de pipeta al efectuar cada dilución.
c) Introducir la pipeta usada en la envoltura original.AISLAMIENTO POR EL METODO DE VERTIDO EN PLACA

1. Marcar las placas petri antes de comenzar
2. Utilizando diferentes pipetas inocular 1 ml de las diluciones 10-1, 10-3, 10-5 en las cajas petri estériles que previamente han sido rotuladas.
3. Adicionar 15 a 20 ml de agar plate count fundido y mantenido a 45ºC en baño de agua.
4. Homogenizar el inoculo con movimientos circulares afavor y en contra de las manecillas del reloj, así como con movimientos hacia arriba y hacia abajo.
5. Dejar solidificar.
6. Incubar a 35± 2ºC durante 24 horas, con la tapa hacia abajo.
7. Revisar el crecimiento.













AISLAMIENTO POR EL METODO DE DISPERSION EN LA SUPERFICIE

1. Marcar las placas petri antes de comenzar
2. Utilizando diferentes pipetas inocular 0.1 ml de lasdiluciones 10-1, 10-3, 10-5 en la superficie de las cajas petri con agar Plate Count, que previamente han sido rotuladas.
3. Distribuir el inoculo sobre la superficie del agar con varilla de vidrio acodad estéril, utilizando una para cada dilución.
4. Mantener las placas en su posición hasta que el inoculo sea absorbido totalmente por el agar.
5. Invertir las placas e incubar a 35± 2ºCdurante 24 horas.
6. Revisar el crecimiento.
















AISLAMIENTO POR EL METODO DE ESTRIA CRUZADA

1. Marcar las placas petri antes de comenzar
2. Esterilizar el asa bacteriológica por incineración.
3. Enfriar el asa esperando unos minutos sin agitarla.
4. Tomar una asada de la muestra (directa o dilución 10-1) y colocarla en el borde de la placa petri que contiene medioselectivo, haciendo estrías continuas hacia el centro de la caja de acuerdo al esquema
5. Esterilizar el asa nuevamente y enfriarla
6. Hacer una segunda serie de estrías tocando la porción final de la anterior.
7. Esterilizar el asa nuevamente y enfriarla.
8. Repetir los pasos 4 y 5 para continuar con la serie de estrías.
9. Esterilizar el asa y enfriarla.
10. Tapar la caja.
11. Invertir lasplacas e incubar a 35± 2ºC durante 24 horas.
12. Revisar el crecimiento.






















INOCULACION EN TUBO CON MEDIO LÍQUIDO

1. Marcar los tubos con caldo antes de comenzar
2. Esterilizar el asa bacteriológica por incineración.
3. Enfriar el asa esperando unos minutos sin agitarla.
4. Tomar una asada de la muestra.
5. Introducir el asa en el caldo y...