Anaerobios 2015

Universidad del Salvador-INTA
Carrera de Veterinaria
Cátedra de Bacteriología y Micología
Trabajo Práctico N° 10: Anaerobios

Los anaerobios pueden definirse como aquéllos organismos que no requieren oxígeno para su reproducción. Sin embargo varían en sus sensibilidad al oxígeno: anaerobios facultativos (no son sensibles al O2), anaerobios aerotolerantes, microaerotolerantes y estrictos (gradovariable de sensibilidad al O2).

Consideraremos los anaerobios para los cuales el O2 resulta letal en distinto grado.
Existen unos pocos géneros de anaerobios de importancia como productores de enfermedad en animales, ej.: Clostridium, Fusobacterium, Prevotella (Bacteroides), Actinomyces y Treponema. Otros géneros de anaerobios se encuentran en el intestino y rumen pero no son importantes en labacteriología clínica (Eubacterium, Veillonella, Peptococcus, Peptoestreptococcus). Además, muchos géneros tratados como anaerobios, tales como Enterobacteriaceae, Actinobacillus, Streptococcus, son en realidad anaerobios facultativos y están presentes en el contenido intestinal y en los tejidos necrosados.

Técnicas de cultivo
La metodología debe excluir el oxígeno de las muestras y cultivos.Algunas de las técnicas empleadas son las siguientes:

1.-Jarras anaeróbicas



a.-Sistema de sobres generadores. Utilizan sobres generadores de H2 y CO2 y un catalizador (Paladium). El H2 se combina con el O2 presente en el aire que contiene la jarra para formar H2O.

b.- Sistema de evacuación y reemplazo de gases. Por tres veces el aire de la jarraes reemplazado por una mezcla de gases (Ej.: 80% N2, 10% H2, 10% CO).


2.-Cámara anaerobia

Todas las manipulaciones se realizan en una atmósfera libre de O2, dentro de la cámara.

3.-Medios pre-reducidos
Los medios son preparados y se mantienes libre de oxígeno mediante cierre hermético. También pueden hervirse 10 min y enfriarse rápidamente para eliminar el oxígeno antes de la siembra. Lasplacas de medios de aislamiento deben prepararse preferentemente en el mismo día. Los subcultivos a partir de aislamientos deben realizarse rápidamente (dentro de los 20 minutos) para evitar la acción letal del oxígeno sobre los microorganismos por exposición de las placas al aire.
Los medios líquidos deben inocularse con pipeta Pasteur dejando caer el inóculo en el fondo del tubo, a medida quese retira la pipeta del medio.

4.-Medios conteniendo agentes reductores
Se agregan sustancias que disminuyen el potencial de óxido- reducción del medio (Ej.: clorhidrato de cisteína, trozos de tejidos como músculo o hígado, ácido tioglicólico, sulfito de sodio). El oxígeno es reducido químicamente antes de la inoculación. Algunos indicadores de óxido-reducción (resazurina, azul de metileno)permiten controlar el estado de oxidación del medio.
Una concentración de 0,2% de agar evita las corrientes de convección y lentifica la incorporación de O2.

Toma de muestra y transporte
Los especímenes para el cultivo de anaerobios deberían ser inoculados directamente del animal o del tejido de necropsia en los medios adecuados. De no ser posible deben ser transportados lo más rápidamenteposible al laboratorio, preferentemente en atmósfera anaerobia

Identificación
Se realiza por morfología, características culturales, pruebas bioquímicas, cromatografía líquido-gaseosa y toxigenicidad en animales. La cromatografía líquido-gaseosa resulta útil debido a que los ácidos grasos volátiles y no volátiles son específicos.
Algunos de los criterios utilizados en la identificación de anaerobiosson los siguientes:

Desarrollo en agar sangre
Se utiliza agar base sangre, agar Brewer, o agar Brucella con 5% de sangre (generalmente ovina o bovina). Cuando es incubado anaeróbicamente permite el desarrollo de anaerobios y anaerobios facultativos. Debe realizarse una prueba de aerotolerancia (desarrollo en presencia de O2) de cada tipo de colonia para determinar si es realmente un anaerobio....