Análisis de sangre.

METODOS DE ANÁLISIS EN QUIMICA CLINICA
ANÁLISIS DE SANGRE
1. Análisis en suero
1.1. Evaluación de la función renal.
ACIDO URICO:

Es el producto resultante del metabolismo de las nucleoproteínas. La insuficiencia
renal crónica avanzada produce un incremento progresivo del nivel de ácido úrico en el plasma. Se
deposita en los tejidos en forma de uratos dando lugar a la enfermedad conocidacomo “gota”.
Intervalos de referencia: 36-77 mg/L en Hombres
25-68 mg/L en Mujeres
Métodos de análisis:
• Método espectrofotométrico: el ácido úrico actúa como un agente reductor del ácido
fonsfotungstico. Previamente hay que eliminar las proteínas por precipitación.
Ácido úrico + H3PW12O40 + O2 → Alantoína + CO2 + AZUL DE TUNGSTENO ( λ = 700 nm)
•

Método enzimático:
URICASA

Ácidoúrico + O2

Alantoína + H2O2 + CO2
Se acopla a una reacción indicadora

• Método polarográfico:
Se emplea un sensor polarográfico de O2. En la reacción anterior, se mide el consumo de O2 siendo
proporcional a la concentración de ácido úrico.
• HPLC
Se usa fase inversa y detección espectrofotométrica a λ = 280 ó 235 nm nm
También se puede usar intercambio iónico y detección electroquímica(amperométrica: se mide la
intensidad de corriente a un potencial constante).
1.2. Evaluación de existencia de hiperlipidemia y de riesgo de enfermedades cardiovasculares.
COLESTEROL:

Se encuentra presente en todas las lipoproteínas plasmáticas. Cuando un exceso de
lípidos no se elimina o utiliza, se deposita en tejidos y paredes arteriales, obstruyendo el flujo de
sangre a órganosvitales. Se obstruye la circulación dando lugar, por ejemplo, al infarto de
miocardio.
Intervalos de referencia: 1.20-2.20 g/L
Colesterol HDL: 0.40-1.10 g/L Hombres
0.50-1.20 g/L Mujeres
Métodos de análisis:
La determinación de colesterol total incluye las formas libre y esterificada del mismo. Los métodos
de análisis se dividen en:

1

• Métodos en 1 etapa: son ensayos directos, sinpreparación previa de la muestra de suero.
Suelen ser medidas espectrofotométricas o fluorimétricas. Exhiben a menudo errores debido a
interferencias y a diferencias del color desarrollado por el colesterol libre y el esterificado.
• Métodos en 2 etapas: se introduce una etapa previa de extracción orgánica eliminando muchas
interferencias. Sin embargo, no se elimina el efecto de la respuesta decolor diferencial entre el
colesterol libre y esterificado. Pero se acepta para el trabajo clínico de rutina usando factores de
corrección.
• Métodos en 3 etapas: además de la extracción del colesterol, incluye una etapa de
saponificación que hidroliza la porción acido graso de los esteres del colesterol. Se determina el
colesterol libre total
EXTRACCIÓN

SAPONIFICACIÓN

COLESTEROL LIBRETOTAL

CUANTIFICACIÓN

2

DESARROLLO COLOR

3

1

Colesterol LIBRE
+
Colesterol ESTERIFICADO

• Métodos en 4 etapas: además de la extracción, saponificación y desarrollo del color, incluye
una cuarta etapa en la cual se precipita el colesterol libre con digitonina (saponina que esterifica el
grupo hidroxilo)
↓Colesterol LIBRE
EXTRACCIÓN

DIGITONINA

COLESTEROL ESTERIFICADO2

SAPONIFICACIÓN

COLESTEROL LIBRE

3

Se cuantifica

1

4
CUANTIFICACIÓN

Colesterol LIBRE
+
Colesterol ESTERIFICADO

DESARROLLO COLOR

La cuantificación final del colesterol se hace por la medida del color desarrollado y no se distingue
entre colesterol libre y esterificado. El reactivo reacciona con el colesterol que encuentran y ya
sabemos que el desarrollo delcolor es distinto para el colesterol libre y para el esterificado.
Esta cuantificación final puede hacerse:
Reacción con una sal de Fe3+ : se emplea ácido acético + ácido sulfúrico y se añade una sal de Fe3+
Como producto de reacción se obtiene el catión tetraenílico que se mide a λ = 563 nm.
Reacción con el ácido p-toluensulfónico:
Anhídrido acético

Colesterol + ácido p-toluensulfónico...