Aplicación De La Citometría De Flujo En El Estudio De La Alergia

Aplicación de la citometrìa de flujo en el estudio de la alergia: De la forma al detalle celular

Desde la aplicación de la microscopia por primera vez por R. Hooke en 1665, se abrió un campo de estudio de las poblaciones celulares que componen a los seres vivos. A partir de ese momento se ha logrado elucidar los complejos celulares que trabajan en la regulación de los procesos biológicos. Lamicroscopia aportó grandes avances en el entendimiento y clasificación de las poblaciones celulares. Hoy día se disponen de técnicas que proveen información más detallada sobre la conformación de las poblaciones celulares, siendo la citometrìa de flujo de las técnicas con mayor impacto en su estudio. La citometrìa caracteriza o fenotipifica poblaciones celulares con base en la presencia deproteínas o marcadores que son características de la función celular que cumplen, estas proteínas son receptores de citoquinas, co-receptores y proteínas de señalización entre otras funciones. Su aplicación en el estudio de la alergia ha aportado para la identificación de poblaciones que intervienen en la supresión o desarrollo de la respuesta alérgica, así como también en el diagnostico.
La técnicamezcla fundamentos biológicos, químicos y físicos para poder diferenciar las poblaciones celulares, que al microscopio parecerían similares. Se utilizan anticuerpos monoclonales (mAb) que tienen especificidad por distintas proteínas, llamados marcadores o Cluster of Diferentiation (CD) que se expresan en la células, sea en su membrana interna o externa, dichos mAb se incuban con muestras de células,y el fundamento biológico aplicado es si la célula expresa el marcador al cual es especifico el monoclonal éste se unirá. Luego, aprovechando que el anticuerpo posee en su región Fc conjugado un fluorocromo, todo el complejo célula, CD y mAb se hace pasar por un haz de laser que excita el fluorocromo, emitiendo una longitud de onda especifica, esta señal es registrada por un equipo y procesadapor una computadora que ayuda a la visualización de la información. Además, que permite la purificación de las poblaciones caracterizadas.
Esta herramienta se ha aplicado al estudio de diferentes enfermedades, como la alergia. En el desarrollo de esta enfermedad participan diversas poblaciones celulares, como los linfocitos T y B, eosinófilos, basofilos, mastocitos, células presentadores deantígeno (células dendríticas, macrófagos etc) entre otras. Cada una de estas poblaciones cumple con funciones importantes y expresan marcadores que las agrupan en poblaciones.
La respuesta alérgica se caracteriza por la expresión de IL-4, IL-5 y anticuerpos IgE, esto se conoce como respuesta Th2. Dicha respuesta se presenta en diversas enfermedades, como la alergia al maní y las enfermedadesgastrointestinales eosinofilicas, que son clínicamente distintas, pero la citometrìa ha permitido diferenciar dos tipos de respuesta Th2, en la alergia al maní es controlada por una Th2 (IL-5- IL-4+), mientras que las enfermedades eosinofilicas tienen un perfil Th2 (IL-5+ IL-4+)(Prussin, Lee and Foster). Este ejemplo de aplicación de citometrìa de flujo muestra la utilidad que tiene en la caracterizaciónde sub-poblaciones que provienen de un mismo linaje y que participan en la patogénesis de distintas enfermedades, como la alergia al maní. Cabe resaltar que la identificación de las poblaciones celulares que participan en la alergia no son indicativo para el diagnostico de la misma.
En las últimas décadas se han diseñado variantes de la citometrìa de flujo convencional(Bonetta), aplicadas alestudio de las poblaciones que intervienen en la respuesta alérgica está la mezcla de la citometrìa de flujo con microscopia, como forma de identificar tanto por marcación molecular como por morfología. Esta nueva técnica llamada citometrìa de flujo basada en microscopia, es una herramienta que rescata los principios de la microscopia convencional para la verificación in situ de las detecciones...