Balance de fermentacion de s. cerevisiae

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA

LABORATORIO DE FISIOLOGÍA Y BIOQUÍMICA MICROBIANA

PRACTICA No. 2 “BALANCE DE FERMENTACION”

PROFESORES:

ANGELES MORALES ERIKA BEATRIZ
GARCIA AQUINO ODILIA

EQUIPO: 4 SECCIÓN: 1

| VALOR ASIGNADO | VALOR OBTENIDO |
HIPOTESIS | 3% | |
OBJETIVO | 1% ||
REGISTRO DE DATOS | 3% | |
MANEJO DE DATOS | 4% | |
DISCUSIÓN | 5% | |
CONCLUSIÓN | 3% | |
BIBLIOGRAFÍA | 1% | |
TOTAL | 20% | |

DISEÑO EXPERIMENTAL
Requerimos llevar a Saccharomyces cerevisiae a un ambiente carente de oxigeno para que lleve acabo la fermentación alcohólica, por medio de la Glucosa como sustrato y obtener etanol y bióxido de carbono, para que posteriormenteestos sean cuantificables por distintos métodos. A partir de la mezcla de fermentación se podrá cuantificar la glucosa residual por el método del DNS, etanol por el método de Conway, y finalmente cuantificaremos en CO2 por un método Gravimétrico. El método de Conway es utilizado ya que permite la oxidación del etanol a ácido acético por la reacción efectuada con el dicromato de potasio.
Sellevara acabo la separación de compuestos volátiles por medio del método de Conway, que costa de una cámara de 2 compartimentos, un externo (fuera) y el interno(centro) y se utilizara el reactivo indicado para la muestra1.

En el compartimento externo se coloca la muestra junto con el carbonato de potasio el cual funciona como agente liberador de los grupos -OH y en el compartimento interno secoloca el dicromato de potasio que atrapara a los –OH. El etanol al reaccionar con el dicromato de potasio es oxidado a acetaldehído y ácido acético mientras que el ion crómico (Cr IV) que posee un color amarillo se reduce a crómico (CrIII) el cual tiene un color verde-azul. La intensidad del color es directamente proporcional a la concentración de etanol2.
Primera etapa: oxidación del etanol a etanolSegunda etapa: oxidación del etanol a ácido acético.

Determinación de CO2 por gravimetría:
Después de la fermentación quedo una muestra en el vaso central, en esta muestra lo que paso fue que el dióxido de carbono liberado de la fermentación reacciona con el hidróxido de sodio formando bicarbonato de sodio el cual al estar en presencia de exceso de hidróxido de sodio, vuelve a reaccionarhasta formar carbonato de sodio.
CO2 + NaOH NaHCO3
NaHCO3 + NaOH Na2CO3 + H2O
Después la muestra se transfirió cuantitativamente sobre 20 ml de BaCl2 al 5% contenido en un matraz Erlenmeyer de 125 ml. Se hicieron 2 lavados, de dicho vaso central el cual contenía la muestra, con agua destilada libre de CO2 en este paso lo que ocurrió fue que el clorurode bario reacciono con la muestra y se formo otra sal de carbonato de bario la cual precipito mejor debido al peso atómico del bario.
Na2CO3 + BaCl2 BaCO3 + 2NaCl
El precipitado de BaCO3 que quedo se recupero por filtración a través de papel filtro de Whatman No 1 de peso conocido. El papel con la muestra se deseca en una estufa a 60° C durante 20 y 24 horas y posteriormentehaciendo uso del factor gravimétrico obtenemos la cantidad original de dióxido de carbono en milimoles.

Determinación de Glucosa residual por el método de DNS.

Para determinar la cantidad de glucosa residual se utilizo el método del 3,5 dinitrosalicílico (DNS), esto nos sirvió para calcular la cantidad de glucosa fermentada para posteriormente sacar los milimoles de glucosa este método sebasa en la reducción del DNS (color amarillo) por la glucosa pasando a color rojo cuya presencia puede detectarse por lectura de la absorbancia a 540 nm.

HIPOTESIS
Si Saccharomyces cerevisiae lleva acabo el proceso de fermentación, entonces al ponerla en presencia de glucosa como fuente de carbono y en ausencia de oxigeno, la reducirá dando como resultado la reducción simultanea de...