BIOlogia

Escherichia coli

Giardia lamblia

Dyctiostelium discoideum

Saccharomyces cerevisiae

Caenorhabditis elegans

Drosophila melanogaster

Arabidopsis thaliana

Danio rerio

Xenopuslaevis

Mus musculus

Campo claro

Contraste de fases

Contraste de fases interferencial

Campo oscuro

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

MICROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

MicroinyecciónElectroporación

Fusión de membranas

80.000-100.000 g
60 min

1.000 g
10 min

10.000-20.000 g
20 min

150.000 g
3h

TIPOS DE GRADIENTES EN ULTRACENTRIFUGACIÓN

CENTRIFUGACIÓNEN GRADIENTE ZONAL

Centrifugación zonal.
A) Preparación de un gradiente continuo de
densidad usando un mezclador.
B) Aplicación de la muestra sobre el gradiente.
C) Colocación de los tubos enun rotor
basculante y centrifugación.
D) Recogida en fracciones de los componentes
separados.

Centrifugación diferencial

Rotor angular, generalmente.
Separación en función principalmentedel
tamaño, pero también del coeficiente de
sedimentación s, que depende de la masa
(tamaño × densidad) y de la forma. (medido en
-13
Svedbergs, 1S = 10 segundos)
Aplicación: separación de tiposcelulares,
fraccionamiento subcelular (separación de
orgánulos), separación de asociaciones
macromoleculares, etc.

Centrifugación zonal o de velocidad
de sedimentación

Centrifugaciónisopícnica o de
equilibrio de sedimentación

(en gradiente preformado, continuo o
discontinuo)

(generalmente en gradiente preformado o autoformado, continuo)

Rotor basculante.
Separación en funcióndel coeficiente de
sedimentación s, que depende de masa y
forma. El gradiente evita la mezcla por
convección/difusión: bandas bien separadas. Se
detiene la centrifugación antes de alcanzar elequilibrio. Densidad máxima del gradiente <
densidad de los componentes de la muestra.
Aplicación: separación de macromoléculas, de
orgánulos similares, etc.

Rotor basculante.
Separación en...