BIOQUIMICA DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

1 TITULO:

DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA


2 RESUMEN:
Se realizó el análisis de La Actividad Enzimática de la reacción en función de la cantidad enzimática (composición), de la temperatura y del pH. Así mismo se analizó la especificidad de la acción enzimática, empleando la solución de almidón. Los resultados obtenidos demostraron que la actividad enzimática se ve influenciada por lacantidad de enzima presente en solución. La Actividad Enzimática se ve reflejada con los factores físico-químicos (Temperatura, pH, concentración de enzima, concentración de sustrato), lo cual permite pensar que con la cantidad de concentración de la enzima el tiempo de que se necesita para transformar el sustrato en producto es menor o mayor en la actividad enzimática. Estos últimos resultadosson consistentes por el hecho que las enzimas son catalizadores biológicos de una reacción. Así mismo se demostró que la temperatura tiene un efecto importante en la Actividad enzimática. Si la temperatura aumenta considerablemente la reacción puede no producirse debido a la desnaturalización de la enzima. Si la temperatura es alta y propicia se obtienen los productos de la acción enzimáticasobre el sustrato, siendo 38° a 37°C la temperatura óptima para la acción enzimática del almidón. De igual forma se pudo observar que la reacción enzimática también se ve influenciada por el cambio del pH del medio hasta alcanzar un pH óptimo, el cual para el almidón está alrededor de 5 a 9 (6.6) cerca del pH neutro lo que no sucede con un pH muy básico o muy acido ya que estas condiciones puedendesnaturalizar a la enzima.

3 FUNDAMENTACION:
Se realizó este trabajo con la finalidad de poner en manifiesto la importancia de recocer, de productos que se pueden encontrar en las muestras, debido a la actividad enzimática que ésta posee a su especificidad, una vez identificados, podremos saber la velocidad de reacción, si hay productos, degradaciones, cambios en su estructura, etc.

4INTRODUCCION:
La Actividad Enzimática, es decir, la función de una enzima se puede determinar midiendo la cantidad de sustrato que desaparece o la cantidad de producto formado por unidad de tiempo, viéndolo de esta forma en realidad se mide la velocidad de la reacción. Esta contiene factores que afectan la actividad enzimática:
Concentración de sustrato
Concentración de Enzimas.
Temperatura
pH
Presencia deinhibidores, etc.


5 OBJETIVOS:

Familiarizarse con el concepto de Actividad Enzimática
Determinar la Actividad Enzimática de los sistemas propuestos.
Características de las Actividades Enzimáticas.


6 MATERIALES Y METODOS:
a) Materiales:
Tubos de Ensayo
Incubadora para Baño María
Cocina Eléctrica
Pipetas
Gradilla
Reactivos

b) Métodos:

ETAPA A


COMPONENTES
SISTEMA

I
II
Solución de almidónal 1% pH 6.6
5ml
5ml
Solución de Cloruro de Sodio 0.1M
1ml
1ml
Agua Destilada
4ml
3ml


1 Colocar los tunos al BAÑO MARÍA DE AGUA A 37°C, por 5 minutos.
2 AGREGAR 1ml. De ENZIMA al tubo II, sin retirar del B.M.
3 Seguir con el BAÑO MARÍA DE AGUA A 37°C, durante 30 minutos.
4 CONTROL DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA POR EL SUSTRATO RESIDUAL.

De cada uno de los tubos de incubación (de la etapa A)trasferir 0.1ml. De sus correspondientes del cuadro siguiente del cuadro siguiente (etapa B). Inmediatamente de cumplidos los 30 minutos de incubación.

ETAPA B

COMPONENTES
SISTEMA

I
II
De los tubos I y II: De la Etapa A.
01ml
01ml
Ácido Clorhídrico 0.05 N
5ml
5ml
Solución Yodada
0.5ml
0.5ml

Mezclar: Observar y anotar los resultados de cada tubo de acuerdo a la intensidad del color resultante.ETAPA C

COMPONENTES
SISTEMA

I
II
De los tubos I y II: De la Etapa A.
1ml
1ml
Benedict
1ml
1ml



7 RESULTADOS:

ETAPA A: En este sistema se determina la actividad enzimática, porque es alterada por lo niveles de pH, en este caso, el pH es óptimo porque está en 6.6.
La reacción se evidencia cuando cambia de color, de Blanco lechoso a transparente, porque se alteró su pH. Al ser almidón una...