Bioquimica Practicas Laboratorio

MEMORIAS DE LAS PRÁCTICAS DE BIOQUÍMICA 1º GRADO DE ENFERMERÍA:
1).MATERIALES EMPLEADOS DURANTE LOS EXPERIMENTOS:
-Vasos de precipitados (sirven para disolver, no para medir volúmenes): 1 de 500 ml, 2 de 250 ml, 2 de 100 ml, 2 de 50 ml y 1 de 25 ml.
-Erlenmeyer (sirve para mezclar líquidos agitadolo con la mano y no mide volúmenes con exactitud): 2 de 250 ml, 1 de 100 ml y 1 de 50 ml.-Probetas (mide volúmenes): 1 de 100 ml, 1 de 25 ml y 1 de 5 ml.
-Embudos: 1 de aprox. 8-10 cm y 1 de aprox. 3-4 cm.
-Pipetas (coge líquidos y mide pequeños volúmenes): 1 de 20 ml, 2 de 10 ml, 2 de 5 ml, 1 de 2 ml, 2 de 1 ml y 1 de 0´1-0´2 ml.
-Tubos: 2 tubos de boca esmerilada B-29 con tapón, tubos de centrífuga de mesa grandes (aprox. 3 cm), 8 tubos de centrífuga de mesa pequeños (aprox. 1cm),1 tubo de colorímetro y 2 gradillas con tubo de ensayo.
-Matraz aforado (solo puede medir volúmenes determinados y es el más preciso de todos y para medir con exactitud se debe enrasar)-
-Pipeta Pasteur (sirve para coger pequeños volúmenes y no son reutilizables).
-1 vidrio de reloj.
-1 placa de gotas.
-1 frasco lavador para agua destilada.
-1 propipeta.
2).PRÁCTICA 1: PREPARACIÓN DESOLUCIONES TAMPÓN:
-OBJETIVO: preparación de soluciones tampón y evaluación de su capacidad amortiguadora.
-INTRODUCCIÓN: Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñasde ácidos o bases fuertes. Este hecho es de vital importancia, ya que solamente un leve cambio en el pH de una célula puede producir un paro en la actividad de las enzimas.
Una pequeña cantidad de ácido o base desplaza levemente el equilibrio ácido-base débil, lo cual tiene una consecuencia menor sobre el pH.
Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual dependerá dela constante de equilibrio del ácido o base empleado.
La capacidad tampón o amortiguadora se puede definir como la cantidad de ácido o base que puede neutralizar este sufriendo un desplazamiento del pH en una unidad.
La preparación de un tampón se debe realizar en función de la ley de Henderson-Hasselbach.

Un ejemplo de tampón en nuestro organismo sonlos fluidos intra y extracelulares que contienen pares conjugados ácido-base que actúan como tampones al pH normal de dichos fluidos. Los tampones tienen una gran importancia en la mayoría de los trabajos bioquímicos. La elección del tampón concreto para una experiencia viene determinado por los límites de pH buscados y la capacidad de tamponamiento. Entre los tampones más comunes podemos citarel acético-acetato, fosfato mono y dibásico, cítrico-citrato, tris (hidroximetilaminometano), carbonato-bicarbonato, etc.
-TÉCNICA DE TRABAJO:
1. Preparación del tampón:
Se calculan las cantidades de fosfato mono y dibásico (sódico y potásico) sólidos necesarias para preparar 250 ml de una solución de fosfato 0´05M y pH: 6´6, teniendo en cuenta los valores aparentes de pK´del ácido fosfórico:1´96, 6´80 y 12´00. El tampón fosfato es el más abundante dentro de las células:
H3PO4 H2PO4 - HPO4 2- PO4 3-
En las células se encuentra este equilibrio:
(ácido débil) H2PO4 - HPO4 2- (base conjugada)
Cálculos:
Concentración fosfato= 0´05
pH fosfato= 6´6
[Tampón]=[A]+[B] ; 0´05M=[A]+[B] ; [B]=0´05M-[A][0´05-[A]]
* 6´6=6´8+log ------------------ ; [A]= 0´0307M
[A]
* 0´05 – 0´0307= [B] ; [B]=0´0193
ma / 136´09 g/mol
*Ma= 0´0307M=...