Practica de laboratorio: bioquímica
Páginas: 6 (1298 palabras)
Publicado: 12 de junio de 2011
METOTODOS DE CUANTIFICACIÓN DE BIOMOLECULAS
PRACTICA 7. CUANTIFICACION DE PROTEIAS POR EL METODO DE BRADFORD Y LOWRY.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son moléculas con estructuras complejas y por esto se pueden clasificar de acuerdo a su forma, composición y estructural. Tienen muchas y diversas funciones en la naturaleza, ejemplos de estas son: las encimaticas que aceleran y dirigenreacciones bioquímicas, estructurales que proporcionan protección y sostén, de movimiento que participan en el desplazamiento de organeros o vesículas dentro de las células. De defensa al organismo contra agentes ajenos a este, de transporte de moléculas o iones a través de las membranas o entre células y almacenamiento de las cuales actúan como reserva de nutrientes esenciales.
Niveles de organizaciónde las proteínas
La cadena polipeptidica tiene una secuencia de aminoácidos específica dado por la secuencia del gen. Los bioquímicos han diferenciado varios niveles de organización o estructura y que se diferencian por la sencillez o complejidad de su arreglo tridimensional, así como el tipo de uniones intramoleculares. La mas sencilla es la estructura primaria siendo los enlaces peptidicosquienes mantiene su estabilidad. La estructura secundaria presenta asu vez dos tipos de organización: hélice- alfa y lámina- beta. En la primera etapa, los puentes de hidrogeno se forman dentro de una única cadena polipeptídica y son casi paralelos al eje de la hélice. En la segunda los puentes de hidrógenos se forman entre cadenas adyacentes y pueden presentarse en sentido paralelo o antiparalelo.Las estructuras secundarias y súper secundarias casi siempre están organizadas en dominios. Las estructuras terciarias describen las relaciones entre estos dominios, las formas en las cuales las proteínas plegadas pueden reunir aminoácidos separados en un sentido estructural primario y los enlaces que estabilizan estas conformaciones. Por ultimo , las estructuras proteicas que presentan dos o mascadenas polipeptídicas unidas por fuerzas no covalentes se conoce como cuaternarias, en ellas, la cadena individual se denomina prótomero , mientras que en su conjunto se denominan oligómeros.
Métodos de cuantificación de proteínas.
Sin duda alguna, una de las determinaciones mas usadas en el área de las ciencias biológicas, es una cuantificación de proteínas. Existen muchos métodos pararealizarlas; sin embargo se debe considerar los siguientes criterios para elegir el más adecuado.
1) la cantidad total de proteínas presente en la muestra
2) la concentración de la proteína
3) la especificad del método,
4) la presencia de otras sustancias que pudieran interferir
5) la facilidad y reproducibilidad del método.
La concentración de proteínas se puede determinar midiendo laabsorbancia a 280nm se basa en la capacidad de absorbancia sobre la luz ultravioleta de los aminoácidos aromáticos en proteínas en solución, debido principalmente al os residuos trptófano y tirosina y en menor medida a los residuos fenilalanina. Este método puede usarse para cuantificar soluciones con concentraciones de 20-300mg/mL.
También se pueden medir a traves de la emisión de fluorescenciapor los aminoácidos aromáticos triptofano, tirosina y/o fenilalanina. Usualmente la fluorescencia del triptofano es la medida. La fluorescencia del triptofano es medida y su concentración de proteínas es calculada apartir de una curva de calibración basada en la emisión de la fluorescencia de soluciones estándar preparadas con proteínas purificadas. Este ensayo puede ser usado para la cuantificarsoluciones con concentraciones de 5-50mg/ml.
Existen otros métodos para la cuantificación de proteínas basados en la unión de un colorante. Ejemplos de ellos son:
*Bradford: Se emplea azul brillante de coomassie. Esta diseñado para cuantificar de u1-10 mg de proteínas. Las determinaciones de proteínas en el rango de 10-100 mg pueden ser realizadas incrementando el volumen de la solución del...
PRACTICA 7. CUANTIFICACION DE PROTEIAS POR EL METODO DE BRADFORD Y LOWRY.
INTRODUCCIÓN
Las proteínas son moléculas con estructuras complejas y por esto se pueden clasificar de acuerdo a su forma, composición y estructural. Tienen muchas y diversas funciones en la naturaleza, ejemplos de estas son: las encimaticas que aceleran y dirigenreacciones bioquímicas, estructurales que proporcionan protección y sostén, de movimiento que participan en el desplazamiento de organeros o vesículas dentro de las células. De defensa al organismo contra agentes ajenos a este, de transporte de moléculas o iones a través de las membranas o entre células y almacenamiento de las cuales actúan como reserva de nutrientes esenciales.
Niveles de organizaciónde las proteínas
La cadena polipeptidica tiene una secuencia de aminoácidos específica dado por la secuencia del gen. Los bioquímicos han diferenciado varios niveles de organización o estructura y que se diferencian por la sencillez o complejidad de su arreglo tridimensional, así como el tipo de uniones intramoleculares. La mas sencilla es la estructura primaria siendo los enlaces peptidicosquienes mantiene su estabilidad. La estructura secundaria presenta asu vez dos tipos de organización: hélice- alfa y lámina- beta. En la primera etapa, los puentes de hidrogeno se forman dentro de una única cadena polipeptídica y son casi paralelos al eje de la hélice. En la segunda los puentes de hidrógenos se forman entre cadenas adyacentes y pueden presentarse en sentido paralelo o antiparalelo.Las estructuras secundarias y súper secundarias casi siempre están organizadas en dominios. Las estructuras terciarias describen las relaciones entre estos dominios, las formas en las cuales las proteínas plegadas pueden reunir aminoácidos separados en un sentido estructural primario y los enlaces que estabilizan estas conformaciones. Por ultimo , las estructuras proteicas que presentan dos o mascadenas polipeptídicas unidas por fuerzas no covalentes se conoce como cuaternarias, en ellas, la cadena individual se denomina prótomero , mientras que en su conjunto se denominan oligómeros.
Métodos de cuantificación de proteínas.
Sin duda alguna, una de las determinaciones mas usadas en el área de las ciencias biológicas, es una cuantificación de proteínas. Existen muchos métodos pararealizarlas; sin embargo se debe considerar los siguientes criterios para elegir el más adecuado.
1) la cantidad total de proteínas presente en la muestra
2) la concentración de la proteína
3) la especificad del método,
4) la presencia de otras sustancias que pudieran interferir
5) la facilidad y reproducibilidad del método.
La concentración de proteínas se puede determinar midiendo laabsorbancia a 280nm se basa en la capacidad de absorbancia sobre la luz ultravioleta de los aminoácidos aromáticos en proteínas en solución, debido principalmente al os residuos trptófano y tirosina y en menor medida a los residuos fenilalanina. Este método puede usarse para cuantificar soluciones con concentraciones de 20-300mg/mL.
También se pueden medir a traves de la emisión de fluorescenciapor los aminoácidos aromáticos triptofano, tirosina y/o fenilalanina. Usualmente la fluorescencia del triptofano es la medida. La fluorescencia del triptofano es medida y su concentración de proteínas es calculada apartir de una curva de calibración basada en la emisión de la fluorescencia de soluciones estándar preparadas con proteínas purificadas. Este ensayo puede ser usado para la cuantificarsoluciones con concentraciones de 5-50mg/ml.
Existen otros métodos para la cuantificación de proteínas basados en la unión de un colorante. Ejemplos de ellos son:
*Bradford: Se emplea azul brillante de coomassie. Esta diseñado para cuantificar de u1-10 mg de proteínas. Las determinaciones de proteínas en el rango de 10-100 mg pueden ser realizadas incrementando el volumen de la solución del...
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