Bioquimica


Instituto de Ciencias Biomédicas

Laboratorio de Bioquímica

Reacciones proteicas y uso de espectrofotómetro.



Práctica número 4




Objetivo: Identificar proteínas por la presencia de enlaces peptídicos y grupos aromáticos así como cuantificar las mediante la técnica de biuret.




Prerrequisitos
Definir péptidos, polipeptido y proteínas.
Péptidos: son un tipode moléculas formadas por la unión de varios aminoácidos mediante enlaces peptídicos.
Polipéptido: entre 10 y 100 aminoácidos.
Proteína: más de 100 aminoácidos. Las proteínas con una sola cadena polipeptídica se denominan proteínas monoméricas, mientras que las compuestas de más de una cadena polipeptídica se conocen como proteínas multiméricas.

Clasificación de las proteínas.
1.-Basada en su forma:Proteínas globulares y fibrosas.
2.-Basada en la composición:
Proteínas simples y conjugadas.
3.-De acuerdo a su valor nutricional:
Completas e incompletas.
Nivel de complejidad estructural de las proteínas.

¿Describir y explicar mediante un esquema la reacción entre el reactivo de biuret y los enlaces peptídicos.
Menciona y describa dos reacciones que sean análogas a la xantoproteíca.Mencione dos reacciones que sirvan para cuantificar proteínas.
Define el término secuenciación proteica
Mencione tres reacciones de identificación que se utilizan en la secuenciación proteica
Describa el método de SANGER y mencione qué papel juega en la identificación de proteínas.


Experimento 1
Introducción:
La ninhidrina es un poderoso agente reactivo común para visualizar las bandas deseparación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos2 Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso.
A) reacción de ninhidrina
Metodología:
En 5 tubos de ensayo se agregó .5 ml de la sustancia (peptona, albumina,etc.), .5 ml de agua y .5 ml de nihidrina, se dejó reposar por 10 min se esperaron resultados.
Tubo. Estándar (ml). Agua. Ninhidrina
1. 0.5 peptona
2. 0.5 albúmina .5 a todos .5 a todos
3. 0.5 gelatina
4. 0.5 tirosina
5. 0.5
(Blanco). - L. .5

Resultados : se observó un cambio gradual de todas las muestras unaquedando con un color amarillo más intenso y otras con un color casi transparente, esto debido a la diferencia de concentraciones que presento cada muestra.



B)reacción xantoproteíca
Introducción:
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico concentrado. La prueba da resultadopositivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro.



Metodología:
En 5 tubos de ensayo se agregaron .5 ml de cada sustancia y .5 ml de HNO3, se les llevo a ebullición a cada una de las muestras y se les dejó enfriar y reposar por 10 minutosy al final se les agrego 4 gotas de NH y OH a cada uno de los tubos.
Tubo Estándar(ml) Agua HNO3
1 .5 Peptona
2 .5 albumina .5 a todos
3 .5gelatina
4 .5 tirosina
5 .5 ml

Resultados: Se dio un cambio rápido almomento de llevar las muestras a ebullición, diferentes tonos de violetas y morados intensos aparecieron, de nuevo debido a las concentración de cada muestra.

C)reacción de biuret
Introducción:
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida.
El reactivo, de...