bioquimica

UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA Y NUTRICIÓN
BIOQUÍMICA ACUICOLA PRÁCTICA
ANALISIS DE GRASAS Y ACEITES
PROTOCOLO 1
DETERMINACIÓN DE ÁCIDOS GRASOS (Método directo)
Fundamento:
El método se basa en la liberación de los ácidos grasos contenidos en la muestra lipídica, valorados mediante una solución alcalina en presencia de unindicador como la fenolftaleína.
Reactivos:
Alcohol etílico 95%
Indicador de fenolftaleína
Solución alcalina de KOH o NaOH 01.
Procedimiento:
Pesar 10 gramos de grasa en un erlenmeyer previamente tarado erlenmeyer
Adicionar 50 ml alcohol absoluto y calentar hasta disolución de la grasa, enfriar y añadir 1 ml de fenolftaleína
Valorar con KOH o NaOH, agitando hasta la aparición de unacoloración rosada o violeta.
% de ácido oleico = ml de álcali x N x 28,2 / peso de muestra.
% de ácido láurico = ml de álcali x N x 20,0 / peso de muestra.
% de ácido palmítico = ml de álcali x N x 25,6 / peso de muestra.
PROTOCOLO 2.
DETERMINACION DEL INDICE DE YODO (Método modificado)
Fundamento:
La determinación del índice de yodo en grasa insaturadas sebasa en la absorción del halógeno bajo condiciones definidas para provocar resultados estequiometricos. El Iodo actúa como agente de halogenación, adicionando un agente reductor como el Ioduro de potasio, valorando luego el exceso con Tiosulfato de sodio, empleando como indicador almidón.

Reactivos A:
Disolver 1.35 g de Iodo en 85 ml de ácido acético glacial y completar elvolumen a 100 ml con agua destilada.

Procedimiento:
íPésense unos 0,5 g. de la grasa en un matraz de 250 ml, disuélvase con 10 ml de CI3CH, adicionar 25 ml del reactivo A, y déjense en reposo durante exactamente 30 minutos.
Añádase 10 ml de IK al 10% y agítese intensamente, adicionar 100 ml de agua hervida y fría.
Titúlese el Iodo con una disolución 0.1 N de S2O3Na2, con agitación de lasolución hasta su decoloración si fuere el caso.
Adicionar 1 ml de almidón al 10% y continuar la titulación hasta el cambio de tonalidad de la solución
Registrar el volumen de Tiosulfato consumido enla titulación y calcular el índice de Iodo.
Índice de Iodo = ml de Tiosulfato x N x l2, 69/ Peso de muestra
PROTOCOLO 3.
ÍNDICE DE SAPONIFICACIÓN (Método de neutralización)
Sedefine a la saponificación como la hidrólisis de un éster para dar el correspondiente alcohol y ácido o sal. En el caso de las grasas la reacción se da entre el álcali y la grasa, dando como resultado la formación de jabón (sal alcalina de ácido graso) y glicerina. El índice de saponificación se lo considera como el número de gramos de grasa saponificada por un mol (56,108 g) de hidróxidopotásico. El índice de neutralización y el equivalente de neutralización son definiciones correspondientes que se refieren particularmente a los ácidos grasos en vez de a los glicéridos.
Fundamento:
El índice de saponificación, es una medida de la cantidad de álcali requerida para saponificar un determinado peso de grasa, se lo expresado como el número de miligramos de hidróxido potásico necesariospara saponificar un gramo de grasa.
Reactivos:
Disolver 4 g KOH, en 100 ml de alcohol absoluto con agitación constante hasta el aclaramiento total de la disolución alcalina.
Indicador de fenolftaleína en solución alcohólica al 1%

Procedimiento:
Derretir la muestra a menos que sea líquida y filtrar a través de papel de filtro, para eliminarcualquier impureza
Pesar 2.5 g de muestra y adicionar 25 ml de la solución alcalina- alcohólica de KOH, dejar en reposo por una hora
Calentar por 1 hora a 75°C, hasta emulsión total de la muestra, si es necesario agitar constantemente para obtener una disolución verdadera
Dejar enfriar el residuo lipídico, si este es gelatinoso adicionar 25 ml de alcohol-éter, 1 ml de fenolftaleína y titular...