Bioquimica

HIDRÓLISIS DE TRIGLICERIDOS POR LIPASA PANCREATICA
E IDENTIFICACION POR CROMATOGRAFIA DE CAPA DELGADA

Mónica Santacruz B. - José Luís Villacrés
Laboratorio de Bioquímica II
Universidad de Nariño

Resumen

Se determinó la acción de la lipasa pancreática sobre los triglicéridos; se utilizo la técnica de Cromatografía de Capa Delgada y como soporte Sílica gel para observar la producciónde ácidos grasos y glicerol. Se usó como solución reveladora Ácido fosfomolíbdico y como solvente cromatográfico Éter etílico- Acido Acético-Agua.


Introducción
La cromatografía engloba a un conjunto de técnicas de análisis basadas en la separación de los componentes de una mezcla y su posterior detección.
Las técnicas cromatográficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvilque consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido.
La separación de mezclas de moléculas mediante la cromatografía de capa fina se basa en el principio del reparto entre dos fases.  En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que sedesea separar (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio  (la fase móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar"  (eluír) a las moléculas en la muestra. Debido a que las distintas moléculas en la muestra presentan diferente coeficiente de reparto, la fase


móvil "lavará" a losdistintos componentes con diferente eficiencia, de modo que aquellos que "prefieren disolverse" en la fase móvil serán eluídos más rápido que los que sean preferencialmente solubles en la fase estacionaria.
La cromatografía en capa fina usa como fase estacionaria un sólido como gel de sílice o alúmina conteniendo algún material que hace que se mantenga la fase estacionaria sobre un soporte tal y comoplacas de vidrio, aluminio e incluso materiales plásticos. Las placas pueden prepararse en el laboratorio o adquirirse en el mercado.

Micheel y Schweppe separaron los ácidos grasos de 5 a 18 átomos de carbono, sobre papel al acetato de celulosa (acetilo 22-26%) con una fase móvil constituida por la mezcla de acetato de etilo-tetrahidrofurano-agua (0,6:3,5:4,7 v/v); la localización de lasmanchas se efectuó mediante una solución de cloruro férrico. Y se obtuvieron los siguientes Rf:

Rf para el Acido Láurico: 0.38
Rf para el Acido Palmítico: 0.30
Rf para el Acido Oleico: 0.30

Las grasas son esteres de glicerol y de ácidos grasos superiores; los esteres son hidrolizados para formar ácidos grasos libres y glicerol. En la hidrólisis de glicéridos, el acido graso enlazado al carbonocentral del glicerol tiende a trasladarse a cualquiera de los extremos de la molécula de glicerol si en el esta libre el hidroxilo. Así es posible que la hidrólisis de los glicéridos solo comprenda el desdoblamiento de esteres primarios.
La lipasa pancreática descompone las grasas con bastante rapidez a 15 ºC, temperatura en que el sistema es bastante sólido. Las grasas ingeridas en laalimentación llegan al duodeno y por acción de esta lipasa se transforman en ácidos grasos y glicerol, allí son absorbidos por el epitelio intestinal donde se esterifican hasta formar triglicéridos que rodeados por proteínas se convierten en quilomicrones que van al espacio extracelular y entran a los vasos quilíferos de las vellosidades viajando por la linfa hasta encontrarse en el flujo sanguíneo.Resultados y Análisis

En la cromatografía para triglicéridos no se obtuvieron buenos resultados; pero la hidrólisis de estos por acción de la lipasa pancreática se asume que si se dieron los resultados esperados.

La falla en los resultados finales de la cromatografía en capa delgada se cree que se debió a diferentes factores:

✓ Posible humedad en las placas, ya que estas pueden absorber...