Biosintesis Rna T10

BIOSÍNTESIS DE MACROMOLÉCULAS: RNA
Tema 10: Biosíntesis de RNA en eucariotas. Iniciación de la transcripción: secuencias de reconocimiento, factores generales de transcripción y RNA Polimerasas.

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Identificación y purificación de las RNA polimerasas eucariotas mediante cromatografía de intercambio iónico
Ensayo de la actividad RNA polimerasa Fragmentosde DNA
RNA polimerasa ATP, CTP, GTP, [32P]UTP Mg2+

[32P]-RNA

Precipitación con TCA Contaje

J. Biol. Chem. 249:241 (1974)

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

RNA polimerasas
•RNA polimerasas dependientes de DNA (DdRP) •RNA polimerasa procariota •RNA polimerasas eucariotas •RNA polimerasa I •RNA polimerasa II •RNA polimerasa III •RNA polimerasas de orgánulos •RNA polimerasasdependientes de RNA (RdRP) •RNA polimerasas de virus de RNA RNA polimerasas eucariotas
RNA polimerasa I II III Localización nucleolo núcleo núcleo Sintetiza RNAr, excepto RNAr 5S Pre-RNAm, algunos RNAs nucleares pequeños (snRNAs) Pre-RNAt, RNAr 5S, algunos snRNAs α-amanitina Insensible sensible a 1 µg/ml sensible a 10 µg/ml

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Subunidades de las RNA polimerasasCTD “carboxi-terminal domain” (YSPTSPS)n

Procariotas
Eubacterias β’ β α α
I II

Eucariotas
RNApolI RPA1 RPA2 RPC5 RPC9 RPB6 + otras 9 RNApolII RPB1 RPB2 RPB3 RPB11 RPB6 + otras 7 RNApolIII RPC1 RPC2 RPC5 RPC9 RPB6 + otras 11

Archaebacteria A’/A’’ B D L K + otras 6

ω

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Comparación de la estructura de las RNA polimerasas
Procariota (bacterias)Eucariota (levadura)

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Estructura de la RNA polimerasa
DNA molde saliente

Salida

Tapa

Pinza Timón

Pared Puente Embudo

DNA molde entrante Mandíbula

Mg2+

Poro

NTPs

Transcripción

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Secuencias de Control de la Transcripción
Inicio de la transcripción: Nucleótido a partir del que se inicia eltranscrito primario Promotor: elementos de secuencia cortos a los que se une la RNA polimerasa para iniciar la transcripción Enhancer: Elementos de secuencia cortos que estimulan la transcripción de un gen y cuya función es independiente de su posición y orientación Silenciadores: elementos de secuencia cortos que suprimen la transcripción de un gen Aisladores: Secuencias que definen los bordesde dominios de cromatina regulados coordinadamente Elementos de respuesta: secuencias localizadas upstream y cerca del promotor que hacen que la transcripción responda a estímulos químicos en el ambiente celular

Eucariotas inferiores (levaduras)

Eucariotas superiores

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Promotores
Núcleo del promotor (promoter core) Caja TATA (TATA box)
Expresiónconstitutiva del gen a niveles bajos Localizados cerca del inicio de la transcripción (-45 +40)

Secuencia BRE (TFIIB Recognition Element) Secuencia iniciadora (INR)
Localizada upstream de la caja TATA Reconocida por TFIIB

Localizada en posición -25 Reconocida por la subunidad TBP (“TATA-binding protein”) del TFIID

Elementos Downstream (DPE: Downstream Promoter Elements) Otros elementos CajaGC
Localizado en posición +30 Localizados entre -50 y -200 También se denomina región promotora proximal Une el factor de transcripción SP1 Localizada en posición -75

Localizada en el inicio de la transcripción

Caja CCAAT

No todos los elementos están presentes en todos los promotores Algunos elementos pueden unir distintos factores
Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Elementos desecuencia del Promotor
Core promoter
-75 Hasta -100

CCAAT
CTF, CTB GGCCAATCT

GC
Sp1 GGGCGG

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA

Elementos de secuencia del promotor del gen de la insulina

NRE: negative regulatory element CRE: cAMP response element

En negro factores de transcripción ubicuos En rojo los específicos de células β del páncreas

Biosíntesis de Macromoléculas: RNA...